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W: Fratello, la trascrizione inversa è completata e finalmente l'ultimo passaggio: la PCR quantitativa fluorescente!Ehi, fratello, cos'è la PCR quantitativa in tempo reale?
M: PCR lo sai sempre, vero?
W: Sai, la PCR è la reazione a catena della polimerasi, ed è una tecnologia che aumenta il DNA!
M: È quasi... È un metodo tecnico per amplificare la sequenza target a più di un milione di volte attraverso primer specifici, ma questo indica solo la presenza o l'assenza della sequenza target e non può determinare la quantità del template iniziale.La PCR quantitativa a fluorescenza è un metodo tecnico sviluppato per risolvere questo problema.La PCR in tempo reale e la PCR quantitativa (qPCR) si riferiscono generalmente ad essa.
W: La differenza rispetto alla normale PCR risiede nella quantificazione della fluorescenza?
M: Sì, ovvero, nella fase di estensione di ogni ciclo PCR, viene rilevata l'intensità del segnale di fluorescenza e la quantità iniziale del templato può essere calcolata in base alla variazione dell'intensità del segnale.
W:Sembra così complicato!Devo calcolarlo da solo?
M:Questo richiede che tu impari lentamente, è meglio essere in grado di capire il principio.Ora puoi concentrarti prima sul valore CT, che è un dato sperimentale relativamente intuitivo e la sua dimensione corrisponde alla dimensione della quantità iniziale del modello.Ci sono anche grafici come curve di amplificazione e curve di fusione.Hanno l'ultima parola sul successo o meno del tuo esperimento.
W: Oh, fratello.Allora farò l'esperimento qPCR!
M: Prestare particolare attenzione a non aggiungere modelli nell'area dei reagenti, altrimenti la miscela inutilizzata verrà facilmente contaminata!
W: Capito!

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Tempo di pubblicazione: 22-lug-2022