Costruire SOP Systerm

Stabilire SOP dell'esperimento PCR per standardizzare il comportamento del personale dell'esperimento.

Gli sperimentatori si attengono rigorosamente alle procedure operative e riducono al minimo l'inquinamento da PCR che può essere causato da fattori umani o prevengono il verificarsi di inquinamento durante l'operazione.Inoltre, lo sperimentatore dovrebbe avere le corrispondenti conoscenze e abilità professionali, compresa la competenza nel funzionamento delle apparecchiature correlate, la chiarificazione dell'intero processo di lavoro, la padronanza dei metodi di trattamento della contaminazione e dei metodi di controllo della qualità di laboratorio e la capacità di interpretare correttamente i risultati del test.

Costruzione del laboratorio PCR standard

Il laboratorio PCR è diviso in linea di principio in quattro aree, vale a dire l'area di preparazione dei reagenti, l'area di elaborazione dei campioni, l'area di amplificazione e l'area di analisi del prodotto di amplificazione.Le prime due aree sono aree di pre-amplificazione e le ultime due aree sono aree di post-amplificazione.La zona di pre-amplificazione e la zona di post-amplificazione devono essere rigorosamente separate.I materiali sperimentali, i reagenti, la carta di registrazione, le penne, i materiali per la pulizia, ecc. possono fluire solo dall'area di preamplificazione all'area di post-amplificazione, ovvero dall'area di preparazione dei reagenti, dall'area di elaborazione dei campioni, dall'area di amplificazione e dall'area di analisi del prodotto di amplificazione e non devono fluire nella direzione opposta.Anche il flusso d'aria nel laboratorio dovrebbe fluire dall'area di pre-amplificazione a quella di post-amplificazione, non nella direzione opposta.

Ridurre i passaggi sperimentali

Se il laboratorio esegue solo il rilevamento e l'identificazione della PCR, si consiglia di utilizzare la PCR quantitativa fluorescente invece della PCR convenzionale.

I risultati del rilevamento quantitativo della PCR a fluorescenza possono essere raccolti e analizzati mediante segnali fluorescenti, quindi non è necessario aprire il coperchio per l'elettroforesi dopo la reazione, il che evita la contaminazione dei prodotti della PCR causata dalla fuoriuscita dei prodotti di reazione per formare aerosol.Se si aumenta il numero di aperture del cappuccio durante la fase di caricamento dell'elettroforesi su gel, è probabile che si verifichi contaminazione da aerosol.Si raccomanda di promuovere l'applicazione della PCR quantitativa e di sostituire gradualmente la PCR qualitativa.

Adottare il sistema antinquinamento UNG

Il sistema di contaminazione del prodotto anti-PCR UNG viene utilizzato per la reazione PCR.

Il sistema utilizza dUTP invece di dTTP.Dopo la reazione di PCR, tutti i prodotti di PCR (frammenti di DNA) vengono incorporati con dUTP;nel ciclo successivo della reazione PCR, l'enzima UNG aggiunto al sistema viene incubato a 37°C per 5 minuti prima della PCR, che può essere specifica Degradare tutti i frammenti di DNA contenenti dUTP, quindi eseguire la reazione PCR.Questo può rimuovere completamente la contaminazione da aerosol causata dai prodotti PCR.L'effetto è mostrato nella figura seguente:

Nota: per la serie PCR diretta, è possibile scegliere i prodotti di serie del sistema di inquinamento da prodotti anti-PCR di FJ Biotech

Suggerire

Per i laboratori che conducono test di genotipizzazione su larga scala, si consiglia vivamente di utilizzare il sistema di contaminazione del prodotto anti-PCR UNG per testare i reagenti oltre alla costruzione di laboratori ragionevoli.

Promemoria: l'uso di questo sistema non può rimuovere la contaminazione del prodotto PCR che è già stata causata.Pertanto, il sistema UNG deve essere utilizzato all'inizio del relativo test e il sistema UNG deve essere sempre utilizzato per l'amplificazione PCR, in modo da prevenire la contaminazione dei prodotti PCR.Falso positivo.

Si consiglia di utilizzare il sistema Direct PCR-UNG di Forge Biotech quando si eseguono test su larga scala, come ad esempio:Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG；

Kit PCR diretto per semi di piante-UNG;

Kit PCR diretto per tessuti animali-UNG;

Kit PCR diretto coda di topo-UNG;

Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG。

Questa serie di kit di Foregene può non solo eseguire il rilevamento della PCR rapidamente e su larga scala, ma anche prevenire e controllare efficacemente la contaminazione del prodotto della PCR.