RNase è una parola delicata che molti studenti che spesso conducono esperimenti di estrazione dell'RNA non vogliono sentire.Completamente armato, l'RNA che è stato infine estratto con i reagenti altamente tossici fenolo e cloroformio è stato degradato.Non sono riconciliato!!!Oggi diamo un'occhiata all'origine del famoso Rnase.

La ribonucleasi (RNasi), o RNasi, è una nucleasi che può idrolizzare l'RNA in piccole molecole.L'RNasi, come una piccola molecola proteica, è insolitamente stabile .La sterilizzazione a vapore convenzionale ad alta temperatura e ad alta pressione e gli inibitori proteici non possono disattivarlo completamente.La stabilità dell'RNasi deriva principalmente dai legami disolfuro nella struttura.Ad esempio, l'RNasi comunemente usata del pancreas bovino ha solo 124 aminoacidi, ma contiene 4 legami disolfuro.Il legame di zolfo e il legame disolfuro conferiscono all'RNasi un'eccellente stabilità termica.Inoltre, l'rnasi ha un peso molecolare relativamente piccolo e in molti casi può ripristinare rapidamente la sua conformazione originale.

Oltre ad essere estremamente stabile,Le RNasi sono onnipresenti in laboratorio .RNasi è un meccanismo di difesa biologica.Per una cellula, l'RNA esogeno è spesso fatale.Rispetto al DNA esogeno, l'RNA esogeno è spesso più pericoloso.L'RNA è felicemente trascritto e tradotto, quindi quasi tutti gli organismi hanno sviluppato RNasi per difendersi dall'invasione dell'RNA esogeno.Pertanto, le cellule batteriche coltivate in laboratorio e voi che estraete l'RNA emanate l'aroma di RNasi.I fluidi del corpo umano (saliva, lacrime, ecc.) contengono una grande quantità di RNasi, quindi non piangere quando l'RNA è degradato.Più piangi, peggiore è la degradazione dell'RNA!!La sorella Daiyu non è adatta per l'estrazione dell'RNA!

Inoltre, la tua pelle delicata contiene anche molta RNasi e anche i pennarelli, le pipette, le porte del frigorifero e le maniglie delle porte che sono state toccate dalla pelle contengono RNasi.

Con così tante divagazioni, diamo un'occhiata a come affrontare le RNasi.

La prima cosa a cui tutti pensano quando rimuovono l'RNA èDEPC(dietil pirocarbonato).DEPC denatura principalmente la proteina combinandosi con l'anello imidazolico del gruppo attivo RNasi istidina, inibendo così l'attività dell'enzima.Il DEPC allo 0,1% può avere un migliore effetto di rimozione su Rnase, ma dobbiamo prestare attenzione al fatto che il DEPC è un noto cancerogeno, quindi è necessario prestare particolare attenzione quando lo si utilizza.

Per RNase, dobbiamo partire da due aspetti,il primo è quello di inibire l'attività dell'RNasi endogena

I reagenti convenzionali per l'estrazione dell'RNA come l'isotiocianato di guanidina e il DTT contenuti nel Trizol possono aprire il legame disolfuro dell'RNasi, ma ci sono ancora alcune RNasi, specialmente nei campioni di tessuto, quindi prestare attenzione alle basse temperature.

1.Immergere immediatamente il campione di tessuto in azoto liquido dopo averlo estratto o in una soluzione commerciale per la conservazione dell'RNA.

2.Dopo aver estratto l'RNA del campione di cellule, aggiungerlo alla soluzione di lisi e lisare sulla ghiacciaia

3. È meglio usare azoto liquido per la macinazione quando i campioni di tessuto sono omogeneizzati.Quando si utilizza un omogeneizzatore elettrico senza azoto liquido, prestare attenzione al preraffreddamento completo dell'adattatore dell'omogeneizzato.

Il secondo è la DNasi esogena

1.Sii armato di tutto punto, indossa un camice da laboratorio, indossa una maschera e assicurati di indossare un paio di guanti nuovi (non essere così parsimonioso !! Va notato che Trizol è super corrosivo ed è anche molto forte attraverso i guanti, quindi non gocciolare sulle mani).

2.Tutti i puntali delle pipette, le provette EP, le provette per PCR e le altre apparecchiature utilizzate devono essere trattate con de-RNasi.Può essere immerso in DEPC allo 0,1% e quindi pressurizzato ad alta pressione.Prestare attenzione al funzionamento in cappa aspirante.I tiranni locali possono acquistare direttamente i materiali di consumo per la rimozione degli enzimi.

PS: Lascia che ti dica un metodo pigro.Sebbene l'alta temperatura e l'alta pressione non possano rimuovere completamente l'RNasi, ne rimuoveranno gran parte.2 tempi di alta temperatura e alta pressione hanno un buon effetto e l'estrazione dell'RNA ha scarso effetto.

3.L'alcol può denaturare le proteine,quindi il tavolo di estrazione dell'RNA può essere pulito con alcool al 75%. e i guanti possono anche essere spruzzati con alcool.

4.Anche la soluzione finale per la dissoluzione dell'RNA e la provetta da centrifuga devono essere trattate con de-RNasi.L'acqua DEPC è una soluzione di dissoluzione dell'RNA comunemente usata.Parliamo del corretto metodo di preparazione dell'acqua DEPC (ricordati di riconfezionare il DEPC commerciale quando lo acquisti)

Aggiungere DEPC all'acqua ultrapura a 1:1000, agitare bene, lasciare riposare per una notte a 37°C e sterilizzare a 121°C ad alta temperatura e alta pressione per 15 minuti.L'acqua DEPC può essere conservata a -20°C in aliquote da 1 ml.

Infine, per riassumere: la bassa temperatura è la chiave, i materiali di consumo sono gestiti bene, armati di tutto punto e si parla meno!

Bene, questo è tutto per la strategia di oggi.Ti auguro tutta la concentrazione e la purezza dell'RNA che hai menzionato.Entrambi A260/A280 sono 2.0!!!

Ovviamente se usi un filefunzionamento a temperatura ambiente kit di estrazione dell'RNA, potresti non riscontrare i problemi di cui sopra.

Il funzionamento a temperatura ambiente, senza aggiunta di DNasi, estrae l'RNA totale dalle cellule in 11 minuti ed estrae l'RNA totale da tessuti animali o piante in 30 minuti.

Per campioni di prova, si prega di contattare:overseas@foregene.com

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