Kit di isolamento dell'RNA totale animale Kit di estrazione e purificazione dell'RNA totale per tessuti e cellule animali
Descrizione del corredo:
Estrarre in modo rapido ed efficiente RNA totale di elevata purezza e alta qualità da vari tessuti animali.
Non c'è bisogno di preoccuparsi della degradazione dell'RNA.L'intero sistema è privo di RNasi
Rimuovere efficacemente il DNA utilizzando la colonna di pulizia del DNA
Rimuovere il DNA senza aggiungere DNasi
Semplice: tutte le operazioni vengono completate a temperatura ambiente
Veloce: l'operazione può essere completata in 30 minuti
Sicuro: nessun reagente organico utilizzato
Elevata purezza: OD260/280≈1,8-2,1
Descrizioni dei kit
50 preparazioni, 200 preparazioni
Questo kit utilizza ilSpin colonna e formulasviluppato dalla nostra azienda, che può estrarre RNA totale di elevata purezza e alta qualità da vari tessuti animali con alta efficienza.La colonna solo RNA può legare in modo efficiente l'RNA e può essere elaborata simultaneamente con una formula unica Molti campioni.
L'intero sistema è RNase-Free, in modo che l'RNA estratto non venga degradato;Buffer RW1, Buffer RW2 sistema di lavaggio del tampone, in modo che l'RNA ottenuto sia privo di inquinamento da proteine, DNA, ioni e composti organici.
Componenti del kit
| Kit di isolamento dell'RNA totale animale | ||
| Componenti del kit | RI-03011 | RE-03014 |
| 50 tonnellate | 200 t | |
| Tampone RL1* | 25 ml | 100 ml |
| Tampone RL2 | 15 ml | 60 ml |
| Tampone RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Tampone RW2 | 24 ml | 96 ml |
| DdH2O senza RNasi | 10ml | 40ml |
| Colonna solo RNA | 50 | 200 |
| Colonna per la pulizia del DNA | 50 | 200 |
| Manuale di istruzioni | 1 pezzo | 1 pezzo |
Informazioni sul prodotto
| Formato | Colonna rotante | Componente di purificazione | Colonna Foregene, reagente |
| Flusso | 1-24 campioni | Tempo per preparazione | ~30 min (24 campioni) |
| Centrifuga | Centrifuga da tavolo | Separazione per pirolisi | Separazione centrifuga |
| Campione | Tessuto animale;cellula | Importo dei campioni | Tessuto: 10-20 mg;Cella:(1-5)×106 |
| Volume di eluizione | 50-200 microlitri | Volume massimo di carico | 850 microlitri |
Caratteristiche e vantaggi
■ Non c'è bisogno di preoccuparsi della degradazione dell'RNA;l'intero sistema è privo di RNasi
■ Rimuovere efficacemente il DNA utilizzando la colonna di pulizia del DNA
■ Rimuovere il DNA senza aggiungere DNasi
■ Semplice: tutte le operazioni vengono completate a temperatura ambiente
■ Veloce - l'operazione può essere completata in 30 minuti
■ Sicuro: nessun reagente organico richiesto
■ Elevata purezza -OD260/280≈1.8-2.1
Applicazione kit
È adatto per l'estrazione e la purificazione dell'RNA totale da una varietà di tessuti animali freschi o congelati o cellule in coltura.
Parametri del prodotto
■ Applicazioni a valle: sintesi del cDNA del primo filamento, RT-PCR, clonazione molecolare, Northern Blot, ecc.
■ Campioni: tessuti animali, cellule in coltura
■ Dosaggio: tessuti 10-20 mg, cellule (2-5) × 106
■ Capacità massima di legame al DNA della colonna di purificazione: 80 μg
■ Volume di eluizione: 50-200 μl
Diagramma
Kit di isolamento dell'RNA totale animale trattato 20 mg
Campioni di topi freschi, prelevare il 5% di RNA totale purificato all'1% di agar
Elettroforesi del glicogel
1: Milza 2: Rene
3: Fegato 4: Cuore
Conservazione e durata
Il kit può essere conservato per 24 mesi a temperatura ambiente (15–25 ℃) o 2–8 ℃ per tempi più lunghi.Il tampone RL1 può essere conservato a 4 ℃ per 1 mese dopo l'aggiunta di β-mercaptoetanolo (opzionale).
Articoli citati
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Kit di isolamento dell'RNA per altre fonti campionesono disponibili:
Cellula, pianta, virale, sangue, ecc.
L'RNA non viene estratto o le rese di RNA sono basse
Ci sono spesso una varietà di fattori che influenzano l'efficienza del recupero, come: contenuto di RNA del campione di tessuto, metodo di funzionamento, volume di eluizione, ecc.
1. Durante il funzionamento è stato eseguito un bagno di ghiaccio o una centrifugazione criogenica (4 °C).
Raccomandazione: Operare a temperatura ambiente (15-25°C) durante tutto il processo, non ghiacciare il bagno e centrifugare a basse temperature.
2. Conservazione impropria del campione o tempo di conservazione del campione eccessivo.
Raccomandazione: conservare i campioni a -80 °C o congelarli in azoto liquido ed evitare l'uso ripetuto di congelamento-scongelamento;provare a utilizzare tessuto fresco o cellule in coltura per l'estrazione dell'RNA.
3. Lisi del campione insufficiente.
Raccomandazione: durante l'omogeneizzazione del tessuto, assicurarsi che il tessuto sia sufficientemente omogeneizzato e che le cellule del tessuto siano sufficientemente divise per spiegare il rilascio di RNA.
4. L'eluente non è stato aggiunto correttamente.
Raccomandazione: confermare che RNase-Free ddH2O viene aggiunto goccia a goccia al centro della membrana della colonna di purificazione.
5. Non è stato aggiunto il volume corretto di etanolo assoluto al tampone RL2 o al tampone RW2.
Raccomandazione: seguire le istruzioni, aggiungere il volume corretto di etanolo assoluto al tampone RL2 e al tampone RW2 e miscelare bene prima di utilizzare il kit.
6. Il dosaggio del campione di tessuto non è appropriato.
Raccomandazione: utilizzare 10-20 mg di tessuto o (1-5) × 106cellule per 500 microlitri di tampone RL1, poiché l'uso eccessivo di tessuto può comportare una ridotta estrazione di RNA.
7. Volume di eluizione improprio o eluizione incompleta.
Raccomandazione: il volume di eluizione della colonna di purificazione è di 50-200 μl;se l'effetto di eluizione non è soddisfacente, si consiglia di prolungare il tempo di posizionamento a temperatura ambiente dopo l'aggiunta di ddH senza RNasi preriscaldato2O, ad esempio per 5-10 min.
8. La colonna di purificazione presenta residui di etanolo dopo il lavaggio del tampone RW2.
Raccomandazione: se è presente un residuo di etanolo dopo il lavaggio del tampone RW2, la centrifugazione a tubo vuoto per 1 minuto, il tempo per l'operazione di centrifugazione a tubo vuoto può essere aumentato a 2 minuti oppure la colonna di purificazione può essere posizionata a temperatura ambiente per 5 minuti per rimuovere adeguatamente l'etanolo residuo.
L'RNA purificato viene degradato
La qualità dell'RNA purificato è correlata a fattori quali la conservazione del campione, la contaminazione da RNasi e la manipolazione, ecc.
1. I campioni di tessuto non vengono conservati in tempo.
Raccomandazione: se i campioni di tessuto o le cellule non vengono utilizzati tempestivamente dopo la raccolta, criopreservare immediatamente a -80 °C o azoto liquido.Per estrarre l'RNA, utilizzare un campione di tessuto o di cellule appena prelevato quando possibile.
2. Congelamento-scongelamento ripetuto di campioni di tessuto.
Raccomandazione: quando si conservano i campioni di tessuto, è meglio tagliarli in piccoli pezzi per la conservazione e rimuovere uno dei pezzi quando li si utilizza per evitare il ripetuto congelamento-scongelamento del campione e la degradazione dell'RNA.
3. L'RNasi viene introdotta o non si indossano guanti monouso, maschere, ecc. durante l'operazione.
Raccomandazione: gli esperimenti di estrazione dell'RNA vengono eseguiti al meglio in stanze di manipolazione dell'RNA separate e il tavolo viene cancellato prima dell'esperimento.
Indossare guanti e maschere monouso durante l'esperimento per ridurre al minimo la degradazione dell'RNA causata dall'introduzione di RNase.
4. I reagenti sono contaminati da RNasi durante l'uso.
Raccomandazione: sostituire con un nuovo kit di isolamento dell'RNA totale animale per esperimenti correlati.
5. Le provette da centrifuga, i puntali, ecc. utilizzati nella manipolazione dell'RNA sono contaminati da RNasi.
Raccomandazione: confermare che le provette da centrifuga, i puntali, le pipette, ecc. utilizzati nell'estrazione dell'RNA siano tutti privi di RNasi.
L'RNA ottenuto purificato influisce sugli esperimenti a valle
L'RNA purificato dalla colonna di purificazione, se gli ioni di sale, il contenuto proteico è troppo grande influenzerà l'esperimento a valle, come ad esempio: trascrizione inversa, Northern Blot et al.
1. L'RNA eluito ha residui di ioni salini.
Raccomandazione: verificare che sia stato aggiunto il volume corretto di etanolo al tampone RW2 ed eseguire 2 lavaggi della colonna di purificazione alla velocità centrifuga indicata per il funzionamento;se sono presenti residui di ioni salini, lasciare la colonna di purificazione nel tampone RW2 per 5 minuti a temperatura ambiente ed eseguire la centrifugazione per massimizzare la rimozione della contaminazione salina.
2. Residuo di etanolo nell'RNA eluito.
Raccomandazione: Confermare che dopo il lavaggio del tampone RW2, eseguire l'operazione di centrifugazione del tubo vuoto alla velocità di centrifugazione indicata per il funzionamento, aumentare il tempo dell'operazione di centrifugazione del tubo vuoto a 2 min se sono ancora presenti residui di etanolo o lasciarlo a temperatura ambiente per 5 min dopo la centrifugazione del tubo vuoto per massimizzare la rimozione del residuo di etanolo.
