La seguente analisi dei possibili problemi inBuccaletampone/FTA card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

La colonna di purificazione è ostruita

In questo kit, nell'operazione di estrazione del DNA genomico, la colonna di purificazione viene adsorbita direttamente sulla miscela di lisi enzimatica del campione senza fase di centrifugazione e la colonna di purificazione può essere bloccata a causa dell'enzimaizzazione incompleta e dell'elevata viscosità del campione.

Le seguenti possibili cause sono le seguenti:

1. Digestione enzimatica incompleta di campioni di tessuto.

Raccomandazione: il tempo di elaborazione del campione di Foregene Protease può essere opportunamente esteso oppure il supernatante può essere prelevato dopo la centrifugazione a 12.000 rpm (~13.400× g) per 5 min.

2. Uso eccessivo di campioni di tessuto o tessuti di grandi dimensioni.

Raccomandazione: è meglio non superare 1Buccale tampone nel campione;se il campione è troppo grande, aumentare di conseguenza il dosaggio di Buffer ST1, Foregene Protease, buffer ST2.

3. La viscosità del campione è troppo alta.

Raccomandazione: i campioni possono essere opportunamente diluiti con 10 mM di Tris-HCl prima dell'estrazione del DNA genomico.

4. Sono stati aspirati frammenti della carta ematica.

Raccomandazione: il tempo di centrifugazione transitorio del passaggio 6 dell'estrazione genomica del punto di sangue (scheda FTA) può essere opportunamente esteso.

Bassa resa o assenza di DNA

Ci sono spesso una varietà di fattori che influenzano la resa del DNA genomico, tra cui l'origine del campione, le condizioni di conservazione del campione, la preparazione del campione, la manipolazione, ecc.

Il DNA genomico non può essere ottenuto durante l'estrazione

Le possibili cause sono le seguenti:

1. La conservazione impropria dei campioni o la conservazione troppo lunga porta alla degradazione del DNA genomico.

Raccomandazione: i tamponi orali dovrebbero essere preferibilmente prelevati di recente e non è consigliabile utilizzare tamponi conservati per le operazioni di estrazione del DNA genomico;i campioni di macchie di sangue dovrebbero garantire che la qualità sia qualificata e il tempo di conservazione non dovrebbe essere troppo lungo.

2. Un uso insufficiente di tessuto può comportare l'impossibilità di estrarre il corrispondente DNA genomico.

Raccomandazione: seguire ilbucal istruzioni per il campionamento del tampone nella guida operativa e strofinare quante più volte possibile in modo da poter attaccare al tampone orale un numero sufficiente di cellule per l'estrazione del DNA genomico;per l'estrazione del campione di macchie di sangue, l'area di taglio delle macchie di sangue può essere opportunamente aumentata.

3. La Foregene Protease è conservata in modo improprio, con conseguente diminuzione della sua attività o inattivazione.

Raccomandazione: Confermare le condizioni di conservazione dil'Foregene Protease o sostituirlo con un nuovo Foregene Protease per la reazione enzimatica.

4. Conservazione impropria del kit o tempo di conservazione troppo lungo, con conseguente guasto di alcuni componenti del kit.

Raccomandazione: acquistane uno nuovoBuccale DNA tamponeisolamento kit per procedure correlate.

5. Il tampone WB non aggiunge etanolo assoluto.

Raccomandazione: verificare che il buffer WB aggiunga il volume corretto di etanolo assoluto.

6. L'eluente non è correttamente aggiunto al film di silicone.

Raccomandazione: aggiungere 65°Cl'eluente preriscaldato scende al centro della membrana di silicone e lascia a temperatura ambiente per 5 minuti per aumentare l'efficienza di eluizione.

LDNA genomico a bassa resa isolato

Le seguenti possibili cause sono le seguenti:

1. La conservazione impropria dei campioni o la conservazione troppo lunga porta alla degradazione del DNA genomico.

Raccomandazione: i tamponi orali sono preferibilmente appena campionati e i tamponi conservati non devono essere utilizzati per l'estrazione del DNA genomico.

2. Se la quantità di campione di tessuto è troppo piccola, il contenuto di DNA genomico estratto sarà inferiore.

Raccomandazione: seguire le istruzioni per il campionamento del tampone orale nella guida operativa, pulendo il maggior numero di volte possibile in modo da poter attaccare al tampone orale un numero sufficiente di cellule per l'estrazione del DNA genomico.

3. La Foregene Protease è conservata in modo improprio, con conseguente diminuzione della sua attività o inattivazione.

Raccomandazione: Confermare le condizioni di conservazione dithe Foregene Protease o sostituirlo con uno nuovo Foregene Proteasi per reazione enzimatica.

4. Problemi con l'eluente.

Raccomandazione: utilizzare il tampone EB per l'eluizione;se si utilizza ddH₂O o altri eluenti, confermare che il pH dell'eluato sia compreso tra 7,0 e 8,5.

5. L'eluato non viene aggiunto goccia a goccia correttamente.

Raccomandazione: aggiungere gocce di eluente al centro della membrana di silicone e lasciare a temperatura ambiente per 5 minuti per aumentare l'efficienza di eluizione.

6. Il liquido di eluizione si accumula troppo poco.

Raccomandazione: utilizzare almeno l'eluente per l'eluizione del DNA genomico come richiesto nelle istruzioninon di meno di 15μl.

Low purezza of DNA genomicoisolato

La bassa purezza del DNA genomico può portare al fallimento o a risultati insoddisfacenti degli esperimenti a valle, come ad esempio: gli enzimi non possono essere aperti, la PCR non può ottenere il frammento genetico di interesse, ecc.

Le possibili cause sono le seguenti:

1. Inquinamento da eteroproteine, inquinamento da RNA.

Analisi: la colonna di purificazione non è stata lavata utilizzando il tampone PW;la colonna di purificazione del lavaggio Buffer PW non è stata lavata utilizzando la velocità centrifuga corretta.

Raccomandazione: assicurarsi che non vi sia precipitazione nel supernatante prima di aggiungere etanolo;assicurarsi di lavare la colonna di purificazione secondo le istruzioni e questo passaggio non può essere omesso.

2. Inquinamento da ioni di impurità.

Analisi: la colonna di purificazione del lavaggio con tampone WB è stata omessa o lavata solo una volta, con conseguente contaminazione ionica residua.

Raccomandazione: accertarsi di lavare il tampone WB 2 volte come indicato per rimuovere il più possibile gli ioni residui.

3. Contaminazione da enzimi RNA.

Analisi: RNasi estranee sono state aggiunte al tampone;L'operazione di lavaggio del tampone PW non era corretta, con conseguenti residui di RNasi, che influivano sulle operazioni sperimentali dell'RNA a valle, come la trascrizione in vitro.

Raccomandazione: acido nucleico della serie Foregeneisolai kit di zione possono rimuovere l'RNA senza ulteriore aggiunta di RNasi,così Tampone buccale/FTA Card Kit di isolamento del DNAbisogno't aggiungere RNasi;assicurarsi di seguire le istruzioni per la colonna di purificazione del lavaggio Buffer PW e questo passaggio non può essere omesso.

4. Residuo di etanolo.

Analisi: il tampone WB non ha eseguito la centrifugazione con tubo vuoto dopo aver lavato la colonna di purificazione.

Raccomandazione: eseguire la corretta operazione di centrifugazione con tubo vuoto secondo le istruzioni.

5. Altro inquinamento da impurità.

Analisi: i campioni salvati oi campioni speciali non vengono pretrattati.

Raccomandazione: pretrattare accuratamente il campione come indicato.