1 ： Sostituisci le forniture sperimentali in tempo

Impostare il controllo negativo (NTC) e ripeterlo molte volte.Una volta accertata la contaminazione del prodotto PCR in laboratorio, sostituire tempestivamente tutte le forniture sperimentali.Ad esempio: ri-diluire e preparare i primer, ri-sterilizzare la punta della pipetta, il tubo EP, ddH2O, ecc., sostituire con una nuova pipetta e prendere temporaneamente in prestito altri laboratori per eseguire esperimenti di PCR.Il laboratorio contaminato deve essere ventilato e irradiato con raggi ultravioletti fino all'eliminazione della contaminazione del prodotto PCR prima di procedere con l'esperimento.

2: prolunga il tempo di esposizione ai raggi UV

Vale la pena notare che per rimuovere la contaminazione del DNA, la normale radiazione ultravioletta dovrebbe essere prolungata di 2 ore rispetto al solito.Anche così, l'effetto dell'irradiazione UV sulla rimozione di piccoli frammenti (inferiori a 200 bp) di contaminazione del DNA non è ancora buono.

La lunghezza d'onda ultravioletta (nm) è generalmente di 254/300 nm ed è sufficiente irradiare per 30 minuti.Va notato che quando si sceglie l'UV per eliminare la contaminazione dei prodotti di PCR residui, è necessario considerare la lunghezza del prodotto di PCR e la distribuzione delle basi nella sequenza del prodotto.L'irradiazione UV è efficace solo per frammenti lunghi superiori a 500 bp e ha scarso effetto su frammenti corti.

Durante l'irradiazione UV, le basi pirimidiniche nel prodotto PCR formeranno dimeri.Questi dimeri possono terminare l'estensione, ma non tutte le pirimidine nella catena del DNA possono formare dimeri e anche l'irradiazione UV può rompere i dimeri..Il grado di formazione del dimero dipende dalla lunghezza d'onda UV, dal tipo di dimero pirimidinico e dalla sequenza di nucleotidi adiacenti al sito del dimero.Pertanto, se i frammenti amplificati PCR sono piccoli, si consiglia di utilizzare il sistema di contaminazione del prodotto anti-PCR UNG.

3 ： Spazzini dell'inquinamento del DNA comunemente usati

Gli aerosol vengono generati facilmente quando vengono aggiunte le pipette, il che è difficile da evitare e si depositerà rapidamente.Pertanto, è senza dubbio una buona scelta utilizzare frequentemente speciali scavenger di inquinamento da DNA per prevenire la diffusione dell'inquinamento da DNA.

4: utilizzare il sistema antinquinamento UNG

Dopo aver rimosso la contaminazione del prodotto PCR, il laboratorio di analisi può utilizzare il sistema di contaminazione del prodotto anti-PCR UNG per prevenire la contaminazione del prodotto PCR.Nei laboratori generali, è possibile eseguire semplici partizioni sperimentali, separare rigorosamente l'area del prodotto PCR da altre aree, stabilire determinate regole e regolamenti di laboratorio e condurre una formazione pertinente per prevenire il verificarsi di contaminazione del prodotto PCR.

Raccomandazioni: Stabilire un laboratorio PCR ragionevole, mantenere un buon ambiente PCR, formulare procedure operative PCR standard e coltivare la rigorosa consapevolezza operativa degli sperimentatori sono le chiavi per prevenire o ridurre l'inquinamento degli esperimenti PCR.