Stabilire SOP dell'esperimento PCR per standardizzare il comportamento del personale dell'esperimento.
Lo sperimentatore si attiene rigorosamente alle procedure operative e riduce al minimo l'inquinamento da PCR che può essere causato da fattori umani o previene il verificarsi di inquinamento.Inoltre, lo sperimentatore dovrebbe avere le corrispondenti conoscenze e abilità professionali, compresa la competenza nel funzionamento delle apparecchiature correlate, la chiarificazione dell'intero processo di lavoro, la padronanza dei metodi di trattamento della contaminazione e dei metodi di controllo della qualità di laboratorio e la capacità di interpretare correttamente i risultati del test.
Istituire un laboratorio PCR standard.
Il laboratorio PCR è suddiviso in quattro aree in linea di principio, vale a dire l'area di preparazione dei reagenti, l'area di elaborazione dei campioni, l'area di amplificazione e l'area di analisi del prodotto di amplificazione.Le prime due aree sono aree di pre-amplificazione e le ultime due aree sono aree di post-amplificazione.La zona di pre-amplificazione e la zona di post-amplificazione devono essere rigorosamente separate.I materiali sperimentali, i reagenti, la carta da registrazione, le penne, i materiali per la pulizia, ecc., possono fluire solo dall'area di pre-amplificazione all'area di post-amplificazione, ovvero dall'area di preparazione dei reagenti → area di trattamento dei campioni → area di amplificazione → area di analisi del prodotto di amplificazione, e non devono fluire all'indietro.Il flusso d'aria nel laboratorio dovrebbe anche fluire dall'area di pre-amplificazione all'area di post-amplificazione e non fluire all'indietro.Il design ideale del laboratorio PCR è mostrato di seguito:
Figura A: Modalità di installazione del laboratorio PCR ideale con pressione negativa nella stanza tampone
Figura B: Modalità di installazione del laboratorio PCR ideale con pressione positiva nella stanza tampone
I diagrammi di configurazione del laboratorio PCR riportati nella Figura A e nella Figura B dovrebbero essere una modalità di configurazione più ideale e il laboratorio con le condizioni può fare riferimento a questa modalità per la progettazione.Per i laboratori ordinari, si consiglia di separare l'area di amplificazione PCR e l'area di analisi del prodotto e di ridurre il più possibile l'apertura del coperchio nell'area di preparazione del campione e nell'area di amplificazione PCR.Ricorda: è severamente vietato portare prodotti e forniture sperimentali nell'area di analisi del prodotto nell'area di preparazione dei campioni e nell'area di amplificazione PCR.
Se il laboratorio esegue solo il rilevamento e l'identificazione della PCR, si consiglia di utilizzare la PCR quantitativa fluorescente invece della PCR convenzionale.
I risultati del rilevamento quantitativo della PCR a fluorescenza possono essere raccolti e analizzati mediante segnali di fluorescenza, quindi non è necessario aprire il coperchio per l'elettroforesi dopo la reazione, il che evita la contaminazione del prodotto PCR causata dalla fuoriuscita di prodotti di reazione per formare aerosol.Se si aumenta il numero di aperture del cappuccio durante la fase di caricamento dell'elettroforesi su gel, è probabile che si verifichi contaminazione da aerosol.Si raccomanda di promuovere l'applicazione della PCR quantitativa e di sostituire gradualmente la PCR qualitativa.
Il sistema di contaminazione del prodotto anti-PCR UNG viene utilizzato per la reazione PCR.
Il sistema utilizza dUTP invece di dTTP.Dopo la reazione di PCR, tutti i prodotti di PCR (frammenti di DNA) vengono incorporati con dUTP;nel ciclo successivo della reazione PCR, l'enzima UNG aggiunto al sistema viene incubato a 37°C per 5 minuti prima della PCR, che può degradare in modo specifico tutti i frammenti di DNA contenenti dUTP, e quindi eseguire la reazione PCR.Questo può rimuovere completamente la contaminazione da aerosol causata dai prodotti PCR.L'effetto è mostrato nella figura seguente:
Nota: per la serie PCR diretta, è possibile scegliere i prodotti di serie del sistema di contaminazione del prodotto anti-PCR di ForegeneSuggerire
Per i laboratori che conducono test di genotipizzazione su larga scala, si consiglia vivamente di utilizzare il sistema di contaminazione del prodotto anti-PCR UNG per testare i reagenti oltre alla costruzione di laboratori ragionevoli.
Promemoria: l'uso di questo sistema non può rimuovere la contaminazione del prodotto PCR che è già stata causata.Pertanto, il sistema UNG dovrebbe essere utilizzato all'inizio del test pertinente e il sistema UNG dovrebbe essere utilizzato per l'amplificazione PCR, in modo da prevenire la contaminazione dei prodotti PCR Falsi positivi.
Si consiglia di utilizzare il sistema Direct PCR-UNG di Foregene quando si eseguono test su larga scala, come:
Kit PCR diretto foglia vegetale-UNG;
Kit PCR diretto per semi di piante-UNG;
Kit PCR diretto per tessuti animali-UNG;
Kit PCR diretto coda di topo-UNG;
Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG。
Questa serie di kit di Foregenepuò non solo eseguire il rilevamento della PCR rapidamente e su larga scala, ma anche prevenire e controllare efficacemente la contaminazione del prodotto PCR.
Tempo di pubblicazione: 19-mar-2021
