I test di laboratorio iniziano con la raccolta del campione e la raccolta del campione è la più facile da trascurare.La cosa più importante per la raccolta del campione è selezionare il tipo di campione corretto, utilizzare strumenti di campionamento appropriati ed eseguire un trasporto e un'elaborazione ragionevoli.

I. Tipo di campione

I tipi di campioni comuni sono i seguenti:

Il metodo di campionamento può fare riferimento alle specifiche tecniche per il monitoraggio ambientale del nuovo coronavirus nel mercato del commercio agricolo (bazar)”:

1. Campioni di tamponi da tamponi faringei, mani, vestiti e altri oggetti di professionisti: è necessario utilizzare la soluzione di conservazione del virus nella provetta di campionamento del virus e infiltrarsi completamente nei tamponi di cotone di campionamento.La superficie del terreno) viene applicato ripetutamente e risciacquato per più di 3 volte.Allo stesso tempo, è necessario eseguire un campionamento distribuito in più punti sulla superficie dell'oggetto campionato.

2. Campioni di tamponi di superficie alimentare: i campioni di cibo non possono essere raccolti direttamente.Il cibo da raccogliere deve essere separato accuratamente e conservato in un sacchetto di campionamento pulito prima di raccogliere campioni di tampone.È necessario utilizzare la soluzione di conservazione del virus nella provetta di campionamento del virus, dopo aver immerso completamente il tampone di cotone di campionamento, per spalmare e risciacquare ripetutamente la superficie del campione alimentare da raccogliere più di 3 volte.Allo stesso tempo, è necessario eseguire un campionamento distribuito in più punti sulla superficie del campione.

3. Campioni di acque reflue: in base alla distribuzione del sistema di drenaggio sul mercato, selezionare 2-3 punti di campionamento delle acque reflue, concentrandosi sulla raccolta della rete di tubazioni interna, a valle della direzione del flusso d'acqua o sul collegamento con la rete di tubazioni municipale.Per raccogliere un campione di tampone, immergerlo nel liquame con un batuffolo di cotone di campionamento per far assorbire il liquame e sciacquarlo nel tubo di campionamento più di 3 volte.Per raccogliere campioni di acque reflue, utilizzare bottiglie di plastica in polietilene per raccogliere campioni di acque reflue da 30-500 ml;per la raccolta delle acque reflue con un volume superiore a 500 ml, è possibile utilizzare secchi di plastica in polietilene o attrezzature speciali per l'arricchimento del campione d'acqua in loco.Allo stesso tempo, è necessario condurre un campionamento distribuito multipunto per il sito di campionamento delle acque reflue.

4. Campioni animali: per gli animali vivi, i tamponi di campionamento possono essere utilizzati per raccogliere tamponi della superficie corporea, tamponi orofaringei e tamponi anali e campioni di escrementi o secrezioni possono anche essere raccolti e registrati di conseguenza sul foglio di registrazione.Per i campioni di animali che sono stati sottoposti a scuoiatura, ecc., utilizzare tamponi di cotone per raccogliere i campioni di tamponi della superficie corporea e della cavità corporea.È necessario utilizzare la soluzione di conservazione del virus nella provetta di campionamento del virus per infiltrarsi completamente nel tampone di cotone di campionamento, quindi ripetere l'applicazione della superficie del campione alimentare da raccogliere.Shabu più di 3 volte.Allo stesso tempo, è necessario eseguire un campionamento distribuito in più punti sulla superficie del campione.

5. Altri apparecchi: contenitori per il trasporto e l'allevamento di animali come gabbie o acquari.Innanzitutto, osserva o comprendi i tipi specifici di animali immagazzinati e allevati nel contenitore e raccogli campioni di tampone sulla parete interna del contenitore o campioni liquidi del contenuto.

6. Raccogliere campioni di aerosol nelle aree in cui le persone si riuniscono, nelle aree commerciali locali scarsamente ventilate, negli uffici e nei bagni.

II.Strumenti di campionamento
1. Provetta per la raccolta del sangue
Se è necessario eseguire successivamente il test dell'acido nucleico e campioni di anticoagulanti, si consiglia di utilizzare un vaso sanguigno sottovuoto contenente anticoagulante EDTA per raccogliere il sangue;per i campioni di siero, si consiglia di utilizzare un vaso sanguigno sottovuoto senza anticoagulante.

2. Tampone di campionamento

Si consiglia di utilizzare tamponi in polipropilene invece di tamponi in alginato di calcio o tamponi con bastoncini di legno, perché possono contenere sostanze che inattivano determinati virus e inibiscono il test PCR.I tamponi con testine di cotone non possono essere utilizzati, perché le fibre di cotone hanno un forte assorbimento di proteine ​​e non sono facilmente eluite nella successiva soluzione di conservazione.

Nelle “Specifiche tecniche per la raccolta mista 10 in 1 e il rilevamento degli acidi nucleici del nuovo coronavirus”, è chiaramente stabilito che “il tampone di campionamento deve essere realizzato in poliestere, nylon e altri materiali diversi da cotone e alginato di calcio e il manico deve essere realizzato con materiale diverso dal legno.Il punto di rottura è a circa 3 cm dalla parte superiore della testa del tampone, che è facile da rompere.

Il CDC negli Stati Uniti ha anche menzionato “Usare solo tamponi in fibra sintetica con aste in plastica o filo.Non utilizzare tamponi di alginato di calcio o tamponi con aste di legno,in quanto potrebbero contenere sostanze che inattivano alcuni virus e inibiscono i test PCR.

Attualmente molto utilizzato è un tampone floccato in nylon sterile monouso combinato con un'asta di plastica.Il tampone floccato ha un migliore assorbimento d'acqua e velocità di rilascio.A seconda dei diversi siti di campionamento, anche la testina del tampone presenta dimensioni e fibre diverse.Lo spessore."

3. Soluzione per la conservazione del trasporto del campione

Soluzione di conservazione dell'inattivazione del virus: una quantità appropriata di concentrazione di sale di guanidina e una varietà di componenti di lisi del virus possono lisare direttamente il virus per rilasciare acido nucleico, inattivare RNasi e DNasi e garantire l'integrità dell'acido nucleico, che può essere utilizzato per il successivo rilevamento qPCR.Non può essere utilizzato per la coltivazione e l'isolamento del virus.

Soluzione di trasporto e conservazione del virus: contiene sali, aminoacidi, vitamine, glucosio e proteine ​​necessarie per la sopravvivenza del virus, che possono mantenere l'attività del virus.Può essere utilizzato per l'estrazione dell'acido nucleico e il rilevamento del virus in futuro e può anche essere utilizzato per la coltivazione e la separazione del virus.

4. Provetta per la conservazione del campione e sacchetto per campioni

La provetta di conservazione del campione deve essere una provetta di plastica sterile con tappo a vite che non adsorba l'acido nucleico.Ciascuna provetta deve essere coperta con un sacchetto per campioni per evitare perdite e contaminazioni del campione.

III.Sostanze interferenti nel campione

Sostanze interferenti negli esperimenti di PCR

1. interferente endogeno

Le sostanze presenti nel campione corporeo possono interferire con il rilevamento di altre sostanze.

Sangue:eme (>1mg/ml), emina (>0.1ng/μl), trigliceridi, IgG, ecc.;

Urina:Urea (20 mM);

Sgabello:polisaccaridi vegetali, colato;

Tessuto:proteasi, collagene;

Latte: proteasi, ione calcio;

Droghe: antibiotici, farmaci antivirali, ormoni, ecc.

altro.

2. interferente esogeno

Proviene da sostanze che possono interferire con il rilevamento di altre sostanze in vitro.Additivi e sostanze del campione che possono essere contattati durante la raccolta e l'elaborazione del campione:

Forniture di prova: gel per la separazione del siero, contenitore per la raccolta dei campioni e tappo di gomma, catetere, liquido per il lavaggio del catetere, polvere per guanti, ecc.

Anticoagulante: eparina (>0,1 U/mL), EDTA (>0,5 mM), ecc.;

Solventi organici: isopropanolo (>0,1 IU/ml), betaina, dimetilsolfossido, formammide, glicerina, PEG, ecc.;

Disinfettanti: alcoli (etanolo>1%), aldeidi, fenoli (fenolo>0,2%), perossidi, acidi forti (HCL), alcali forti (NaOH), ecc.;

Detergente:SDS (>0,005%);

Suolo: Humus

Colorante: Indaco

altro.

Nelle effettive condizioni di campionamento all'aperto, come la raccolta di campioni ambientali, i campioni possono contenere una varietà di sostanze interferenti e la composizione delle sostanze interferenti in ogni posizione è diversa, il che richiede che gli esperimenti di interferenza PCR vengano eseguiti in base alle condizioni locali.

IV.Condizioni di conservazione e trasporto del campione

I campioni clinici appena raccolti devono essere inviati al laboratorio entro 2-4 ore dalla raccolta a una temperatura compresa tra 2°C e 8°C.Conservare a 4℃ entro 24 ore.I campioni utilizzati per l'isolamento del virus e il rilevamento dell'acido nucleico devono essere testati il ​​prima possibile.I campioni che possono essere analizzati entro 24 ore possono essere conservati a 4°C;i campioni che non possono essere rilevati entro 24 ore devono essere conservati a una temperatura pari o inferiore a -70°C (in caso contrario: conservare a 70°C in frigorifero a -20°C).

Riepilogo:La raccolta, il trasporto e la conservazione standardizzati dei campioni sono essenziali per i test successivi.I falsi negativi di molti test di laboratorio sono causati da raccolta, trasporto e conservazione impropri dei campioni che portano alla degradazione dell'acido nucleico virale.Tuttavia, molti laboratori ignorano ancora l'importanza del campionamento.Spero che questo articolo possa risvegliare l'attenzione di tutti sul campionamento e rendere il campionamento più scientifico e ragionevole!

Prodotti correlati:

Kit di rilevamento dell'acido nucleico variante SARS-CoV-2 (I) (metodo della sonda fluorescente PCR multiplex) - per il rilevamento di mutanti da Brasile, Sudafrica e Regno Unito