I metodi PCR e la contaminazione da aerosol di acido nucleico nei laboratori di analisi degli acidi nucleici sono come le due facce di una medaglia.Possiamo solo scegliere di averlo o meno, ma non possiamo scegliere se volerlo o spenderlo.

1. Screening del dispositivo di rimozione del DNA

Per ottenere la rimozione spaziale della contaminazione da aerosol di acido nucleico, è prima necessario escludere i dispositivi di rimozione del DNA che possono rimuovere gli acidi nucleici allo stato liquido.Perché non ci sono molti dispositivi di rimozione del DNA che funzionano davvero.Per il metodo sperimentale, fare riferimento a: DNA remover non può essere un "angolo segreto" del laboratorio!

In questo esperimento, 100 copie/μL (CT circa 31) di plasmide ASFV e dispositivo di rimozione del DNA quantificati mediante PCR digitale sono stati miscelati in volumi uguali e quindi fatti reagire a temperatura ambiente rispettivamente per 10 minuti, 20 minuti e 30 minuti.Dopo l'estrazione dell'acido nucleico, è stata eseguita l'amplificazione qPCR.È stato confrontato un controllo positivo miscelato con plasmide e acqua.Poiché l'esperimento non è stato completato contemporaneamente, potrebbe esserci una certa deviazione tra i risultati, ma ciò non influisce sulla conclusione dell'esperimento.Finora ho valutato 10 prodotti commerciali per la rimozione del DNA.Solo i prodotti n. 1, n. 6 e n. 8 possono degradare efficacemente il DNA plasmidico allo stato liquido.Altri prodotti non hanno quasi alcun effetto.

Tabella 1 Effetto di rimozione dell'acido nucleico del dispositivo di rimozione del DNA disponibile in commercio

2. L'esperimento dell'effetto di rimozione del DNA dei disinfettanti comunemente usati

1. Screening dei disinfettanti di uso comune

Esistono molti tipi di disinfettanti comunemente usati nei laboratori: aldeidi, fenoli, alcoli, sali di ammonio quaternario, perossidi, preparati a base di cloro, acidi e basi.Gli effetti di disinfezione di questi disinfettanti sui microrganismi sono stati completamente verificati da esperimenti, ma non ci sono dati sperimentali sufficienti sull'effetto di degradazione degli acidi nucleici.I laboratori di analisi degli acidi nucleici necessitano di un disinfettante che non solo abbia un buon effetto disinfettante sui microrganismi, ma possa anche degradare il DNA.I risultati del test mostrano che solo due preparazioni di cloro di 84 disinfettante e acido tricloroisocianurico e acido cloridrico 1 M soddisfano i requisiti.Poiché l'acido cloridrico 1 M è altamente corrosivo, si raccomanda di utilizzare i preparati a base di cloro per lo smaltimento dei rifiuti nei laboratori di analisi degli acidi nucleici.Tuttavia, i preparati a base di cloro sono corrosivi per i metalli e non possono essere utilizzati per la disinfezione di strumenti e attrezzature.

Tabella 2 Effetti di rimozione del DNA di diversi tipi di disinfettanti

2. La concentrazione minima efficace di preparati a base di cloro

I disinfettanti a base di cloro hanno un forte effetto di degradazione del DNA, ma a causa della loro corrosività e irritazione del metallo, possono essere utilizzati per pulire il pavimento, controsoffitti non metallici, punte di ammollo, provette da centrifuga e altri elementi di prova.

Secondo le "Nuove linee guida tecniche per la disinfezione epidemica di polmonite coronarica": Inquinanti (sangue, secrezioni e vomito dei pazienti) cloro disponibile 5g/L-10g/L disinfettante contenente cloro;pavimenti, pareti e superfici degli oggetti utilizzano il cloro disponibile 1 g/L Disinfettante al cloro: vestiti, biancheria da letto e altri tessuti vengono prima immersi nel disinfettante al cloro con 0,5 g/L di cloro disponibile per 30 minuti, quindi puliti come di consueto.

Tabella 3 Effetto di rimozione del DNA di diverse concentrazioni di disinfettante al cloro

I risultati del test mostrano che: quando la concentrazione effettiva di cloro è maggiore o uguale a 1,2 g/L, il disinfettante contenente cloro può degradare completamente 100 copie/μL di plasmide se utilizzato per 5 minuti.Agendo per 10 minuti, 84 disinfettanti con una concentrazione di cloro efficace maggiore o uguale a 0,6 g/L possono degradare completamente 100 copie/μL di plasmidi.

3. Esperimento di rimozione dell'aria inquinata da aerosol di acido nucleico

Come ripulire l'aria inquinata dagli aerosol di acido nucleico?La maggior parte dei pensieri è creare un ambiente contaminato da aerosol e poi ripulirlo, o ripulire gli acidi nucleici dopo la contaminazione.Per me un esperimento che non può essere ripetuto ei risultati dell'esperimento non possono essere analizzati quantitativamente non ha senso, quindi ho preso in prestito alcuni metodi di disinfezione dell'aria disinfettante.Vedere "Requisiti generali GB27948-2020 per i disinfettanti dell'aria" e "Specifiche tecniche di disinfezione"

1. Materiali di prova

1.1 Dispositivo di rimozione del DNA: in questo esperimento, sono stati selezionati due dispositivi di rimozione del DNA disponibili in commercio 6 e 8 nella Tabella 1.

1.2 Test plasmide: Considerando che il valore CT della maggior parte dell'inquinamento di laboratorio sarà superiore a 30, la concentrazione del plasmide del gene ASFV utilizzato questa volta è di circa 100 copie/μL e il PCR quantitativo fluorescente CT è di circa 31,07.Aggiungere il plasmide al batuffolo di cotone floccato e asciugare all'aria.

1.3 Strumento di prova: lo strumento di disinfezione Bilingkehan KVBOX, gentilmente supportato da Shenzhen Runlian Environmental Technology Co., Ltd., ha eccellenti prestazioni di disinfezione dell'aria con disinfettante al perossido di idrogeno e può uccidere efficacemente spore e altri microrganismi.

1.4 Spazio di prova: una finestra di trasferimento chiusa di circa 0,1 metri cubi.

2. Metodo di prova

La quantità di disinfettante impostata sulla macchina per la disinfezione è di 10 ml e la concentrazione è di 100 ml/m3, che è molto superiore ai "Requisiti generali GB27948-2020 per i disinfettanti dell'aria": quando si utilizza la disinfezione con spray aerosol, la quantità di disinfettante deve essere ≤10 ml/m3