Kit di isolamento dell'RNA totale della pianta Kit di purificazione dell'RNA totale per piante a basso contenuto di polisaccaridi e polifenoli
Specifiche
50 preparazioni, 200 preparazioni
Il kit utilizza la colonna spin e la formula sviluppate da Foregene, che possono estrarre in modo efficiente RNA totale di elevata purezza e alta qualità da vari tessuti vegetali con basso contenuto di polisaccaridi e polifenoli.Per i campioni di piante con alto contenuto di polisaccaridi o polifenoli, si consiglia di utilizzare il kit Plant Total RNA Isolation Plus per ottenere migliori risultati di estrazione dell'RNA.Il kit fornisce la colonna per la pulizia del DNA che può rimuovere facilmente il DNA genomico dal surnatante e dal lisato tissutale.La colonna solo RNA può legare efficacemente l'RNA.Il kit può processare un gran numero di campioni contemporaneamente.
L'intero sistema non contiene RNasi, quindi l'RNA purificato non verrà degradato.Buffer PRW1 e Buffer PRW2 possono garantire che l'RNA ottenuto non sia contaminato da proteine, DNA, ioni e composti organici.
Componenti del kit
| Buffer PSL1, Buffer PS, Buffer PSL2 |
| Tampone PRW1, Tampone PRW2 |
| ddH senza RNasi2O, colonna di pulizia del DNA |
| Colonna solo RNA |
| Istruzioni |
Caratteristiche e vantaggi
■ Funzionamento a temperatura ambiente (15-25℃) durante l'intero processo, senza bagno di ghiaccio e centrifugazione a bassa temperatura.
■ Kit completo RNase-Free, non c'è bisogno di preoccuparsi della degradazione dell'RNA.
■ La colonna di pulizia del DNA si lega specificamente al DNA, in modo che il kit possa rimuovere la contaminazione del DNA genomico senza aggiungere DNasi.
■ Alta resa di RNA: la colonna solo RNA e la formula unica possono purificare efficacemente l'RNA.
■ Alta velocità: facile da usare e può essere completata entro 30 minuti.
■ Sicurezza: non è richiesto alcun reagente organico.
■ Alta qualità: i frammenti di RNA purificati sono di elevata purezza, privi di proteine e altre impurità e possono soddisfare varie applicazioni sperimentali a valle.
Applicazione kit
È adatto per l'estrazione e la purificazione dell'RNA totale da campioni di tessuto vegetale fresco o congelato (soprattutto tessuto fogliare fresco) con basso contenuto di polisaccaridi e polifenoli.
Flusso di lavoro
Diagramma
Plant Total RNA Isolation Kit Plus ha elaborato 50 mg di foglie fresche di polisaccaridi e polifenoli e il 5% di RNA purificato è stato testato mediante elettroforesi.
1: banana
2: Ginkgo
3: Cotone
4: Melograno
Conservazione e durata
Il kit può essere conservato per 12 mesi a temperatura ambiente (15–25 ℃) in ambiente asciutto e 2–8 ℃ per tempi più lunghi (24 mesi).
Il tampone PSL1 può essere conservato a 4 ℃ per 1 mese dopo l'aggiunta di 2-idrossi-1-etantiolo (opzionale).
Guida all'analisi dei problemi
La seguente analisi dei problemi che potresti incontrare inTotale piantaRNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.
La colonna di rotazione è ostruita
Il blocco della colonna di spin causerà la riduzione della resa dell'RNA o addirittura l'impossibilità di purificarlo per ottenere l'RNA e la qualità dell'RNA ottenuto sarà bassa.
Analisi delle cause comuni:
1. Il campione non è completamente rotto.
La frammentazione incompleta del campione può bloccare la colonna di pulizia del DNA, che può anche influenzare la resa e la qualità dell'RNA.Quando si esegue la frammentazione del campione, si consiglia di macinare rapidamente quantità sufficienti di azoto liquido per rompere il più possibile i tessuti come le pareti cellulari e le membrane cellulari dei campioni.Per campioni vegetali di polisaccaridi polifenolici, si consiglia di utilizzare Plant Total RNA Isolation Kit Plus.
2.Aspirare il surnatante isolato della colonna di pulizia del DNA, aspirare l'eventuale pellet di detriti cellulari.
Il pellet di detriti cellulari aspirato può ostruire la colonna solo RNA durante le procedure di adsorbimento dell'RNA (vedere il passaggio 5 della procedura, passaggio 6 della procedura del polifenolo polisaccaride).Si consiglia di prestare attenzione durante l'aspirazione di questo supernatante per evitare che i detriti cellulari vengano aspirati.
3. La quantità iniziale di campione è troppo grande.
Un utilizzo eccessivo del campione provocherà una frammentazione incompleta del campione o una lisi incompleta delle cellule da parte del tampone PRL1 o del tampone PSL1, con conseguente ostruzione della colonna di purificazione per le operazioni di purificazione.Plant Total RNA Isolation Kit ha un massimo iniziale di 50 mg per singola purificazione di un campione operato.Per i campioni vegetali di polisaccaridi polifenolici, ti consigliamo di provare il kit di isolamento dell'RNA totale delle piante Plus.
4. La temperatura della centrifuga è troppo bassa.
Isolamento e purificazione dell'intero RNA, fatta eccezione per l'interruzione dell'azoto liquido del tessuto campione, tutti i passaggi vengono eseguiti a temperatura ambiente (20-25 °C).Alcune centrifughe a bassa temperatura hanno temperature inferiori a 20 °C, che possono causare blocchi nella colonna di pulizia del DNA e/o nella colonna solo RNA.In tal caso, impostare la temperatura della centrifuga a 20-25 °C e preriscaldare la miscela di lisi e/o l'aggiunta del supernatante di separazione dell'etanolo a 37 °C.
Nessun RNA estratto o la resa di RNA è bassa
Di solito ci sono molti fattori che influenzano l'efficienza del recupero, come: contenuto di RNA del campione, metodo operativo, volume di eluizione, ecc.
Analisi delle cause comuni come di seguito:
1.Durante l'operazione è stato eseguito un bagno di ghiaccio o una centrifugazione a bassa temperatura (4°C).
Suggerimento: operare a temperatura ambiente (15-25°C) durante l'intero processo, non eseguire bagni di ghiaccio e centrifugazioni a bassa temperatura.
2.L'RNA è stato degradato a causa di una conservazione impropria del campione o di una conservazione a lungo termine del campione.
Raccomandazione: i campioni appena raccolti devono essere rapidamente congelati in azoto liquido e quindi conservati a -80 ° C per lungo tempo, evitare ripetuti congelamenti e scongelamenti dei campioni;o immergere immediatamente i campioni nella soluzione di stabilizzatore di RNA RNAlater (campioni animali).
3.La frammentazione e la lisi insufficienti del campione portano al blocco della colonna di purificazione.
Suggerimento: durante la macinazione del tessuto, assicurarsi che sia sufficientemente macinato e trasferirlo rapidamente nel tampone PSL1 pre-preparato (confermare che sia stata aggiunta la proporzione corretta di β-ME, vedere il passaggio 1 della procedura).
4.L'eluente è stato aggiunto in modo errato.
Suggerimento: assicurati che RNase-Free ddH2O è gocciolato nel mezzo della membrana della colonna di purificazione.
5.Non è stato aggiunto il volume corretto di etanolo assoluto al tampone PSL2 o al tampone PRW2.
Suggerimento: seguire le istruzioni, aggiungere il volume corretto di etanolo assoluto al tampone PSL2 e al tampone PRW2 e miscelare bene prima di utilizzare il kit.
6.La quantità di campione di tessuto non è appropriata.
Suggerimento: utilizzare 50 mg di tessuto per 500 ml di tampone PSL1.L'uso di troppo tessuto ridurrà la quantità di RNA estratto e anche la purezza dell'RNA risultante sarà ridotta.Si consiglia vivamente che il dosaggio iniziale del campione non superi i 50 mg per operazione di estrazione dell'RNA.
7. Volume di eluizione inappropriato o eluizione incompleta.
Suggerimento: il volume dell'eluente della colonna di purificazione è di 50-200 μl;se l'effetto di eluizione non è soddisfacente, si consiglia di prolungare il tempo a temperatura ambiente dopo l'aggiunta di ddH privo di RNasi preriscaldato2O, come 5-10min.
8. La colonna di purificazione presenta residui di etanolo dopo il lavaggio con il tampone PRW2.
Suggerimento: se la provetta vuota viene centrifugata per 1 minuto e rimane ancora etanolo dopo il lavaggio nel tampone PRW2, è possibile aumentare il tempo di centrifugazione della provetta vuota a 2 minuti oppure posizionare la colonna di purificazione a temperatura ambiente per 5 minuti per rimuovere completamente l'etanolo residuo.
9.Il kit è stato utilizzato in modo errato.
Suggerimento: per i campioni vegetali di polisaccaridi polifenolici, l'utilizzo di kit comuni come il kit di isolamento dell'RNA totale delle piante potrebbe non essere in grado di ottenere campioni di RNA ideali.Si consiglia di utilizzare Plant Total RNA IsolationKit Plus, appositamente progettato per campioni di piante di polisaccaridi polifenolici.Un kit appositamente sviluppato per l'estrazione di RNA da campioni vegetali di polifenoli e polisaccaridi.
Il valore OD260/OD280 è basso
Eluizione dell'RNA con ddH2O e utilizzato per le letture dello spettrofotometro produce bassi valori di OD260/OD280.Si consiglia di utilizzare Tris-HCl 10 mM, pH 7,5 (anziché ddH senza RNasi2O per eluire l'RNA) per ottenere valori OD260/OD280 relativamente corretti, vedere "Saggi di concentrazione e purificazione dell'RNA" a pagina 19.
L'RNA purificato viene degradato
La qualità dell'RNA purificato è correlata a fattori quali la conservazione del campione, la contaminazione da RNasi e la manipolazione.
Analisi delle cause comuni:
1. I campioni di tessuto non sono stati conservati in tempo dopo la raccolta.
Raccomandazione: se i campioni di tessuto non vengono utilizzati in tempo dopo la raccolta, conservarli immediatamente in azoto liquido a bassa temperatura o trasferirli a -80°C per una conservazione a lungo termine dopo il congelamento rapido in azoto liquido, oppure immergere immediatamente i campioni nella soluzione di stabilizzatore di RNA RNAlater (campioni animali).Per l'estrazione dell'RNA, provare a utilizzare campioni di tessuto appena raccolti.
2. Congelamento e scongelamento ripetuti di campioni di tessuto.
Suggerimento: quando si conservano i campioni di tessuto, è meglio tagliarli in piccoli pezzi per la conservazione ed estrarne una parte quando li si utilizza per evitare la degradazione dell'RNA causata dal ripetuto congelamento e scongelamento dei campioni.
3. L'RNasi viene introdotta nella sala operatoria o non indossa guanti monouso, maschere, ecc.
Suggerimento: gli esperimenti di estrazione dell'RNA vengono eseguiti al meglio in operazioni separate sull'RNA e il tavolo di laboratorio deve essere pulito prima dell'esperimento e durante l'esperimento devono essere indossati guanti e maschere usa e getta per evitare la degradazione dell'RNA causata dall'introduzione di RNase nella massima misura.
4.Il reagente è contaminato da RNasi durante l'uso.
Suggerimento: sostituire con una nuova serie di kit di estrazione dell'RNA totale delle piante per esperimenti correlati.
5. Le provette per centrifuga ei puntali delle pipette utilizzati per la manipolazione dell'RNA sono contaminati da RNasi.
Suggerimento: assicurarsi che le provette da centrifuga, i puntali delle pipette, le pipette, ecc. utilizzati nell'estrazione dell'RNA siano tutti privi di RNasi.
Manuali di istruzioni:
Manuale di istruzioni del kit di isolamento dell'RNA totale delle piante
