Cell Direct RT qPCR Kit—SYBR GREEN I Kit di lisi cellulare diretta Cell Ready One-step qRT-PCR
Descrizioni
Questo kit utilizza un esclusivo sistema tampone di lisi in grado di rilasciare rapidamente l'RNA da campioni di cellule in coltura per le reazioni RT-qPCR, eliminando così il lungo e laborioso processo di purificazione dell'RNA.Il modello di RNA può essere ottenuto in soli 7 minuti.Il 5×Direct RT Mix e 2×I reagenti Direct qPCR Mix-SYBR forniti dal kit possono ottenere rapidamente ed efficacemente risultati PCR quantitativi in tempo reale.
5×Direct RT Mix e 2×Direct qPCR Mix-SYBR ha una forte tolleranza agli inibitori e il lisato dei campioni può essere utilizzato direttamente come modello per RT-qPCR.Questo kit contiene l'esclusivo RNA Foregene trascrittasi inversa ad alta affinità e la DNA polimerasi Hot D-Taq, dNTP, MgCl2, tampone di reazione, ottimizzatore e stabilizzatore PCR.
Specifiche
200×20μlRxns, 1000×20μlRxns
Componenti del kit
| Parte I | Tampone CL |
| Foregene Proteasi Plus II | |
| Tampone ST | |
| Seconda parte | Cancellatore di DNA |
| 5 × Mix RT diretto | |
| 2 × Direct qPCR Mix-SYBR | |
| Colorante di riferimento 50× ROX | |
| DdH2O senza RNasi | |
| Istruzioni | |
Caratteristiche e vantaggi
■Semplice ed efficace: con la tecnologia Cell Direct RT, i campioni di RNA possono essere ottenuti in soli 7 minuti.
■ La richiesta del campione è piccola, è possibile testare solo 10 celle.
■ Alta produttività: può rilevare rapidamente l'RNA nelle cellule coltivate in piastre da 384, 96, 24, 12, 6 pozzetti.
■ DNA Eraser può rimuovere rapidamente i genomi rilasciati, riducendo notevolmente l'impatto sui successivi risultati sperimentali.
■ Il sistema RT e qPCR ottimizzato rende la trascrizione inversa RT-PCR in due fasi più efficiente e la PCR più specifica e più resistente agli inibitori della reazione RT-qPCR.
Applicazione kit
Ambito di applicazione: cellule in coltura.
- RNA rilasciato dalla lisi del campione: applicabile solo al modello RT-qPCR di questo kit.
- Il kit può essere utilizzato per i seguenti scopi: analisi dell'espressione genica, verifica dell'effetto di silenziamento genico mediato da siRNA, screening di farmaci, ecc.
Diagramma
Conservazione e durata
La parte I di questo kit deve essere conservata a 4℃;La parte II deve essere conservata a -20 ℃.
Foregene Protease Plus II deve essere conservato a 4℃, non congelare a -20 ℃.
Reagente 2×Direct qPCR Mix-SYBR deve essere conservato a -20℃nell'oscurità;se usato frequentemente, può anche essere riposto a 4℃ per la conservazione a breve termine (consumare entro 10 giorni).
Principi di progettazione dei primer per PCR in tempo reale
Primer in avanti e primer inverso
Per la Real Time PCR, il design del primer è molto importante.I primer sono correlati alla specificità e all'efficienza dell'amplificazione PCR e possono essere progettati con riferimento ai seguenti principi:
Lunghezza del primer: 18-30 bp.
Contenuto in GC: 40-60%.
Valore Tm: il software di progettazione del primer, come Primer 5, può fornire il valore Tm del primer.I valori Tm dei primer a monte ea valle dovrebbero essere il più vicini possibile.Si può utilizzare anche la formula di calcolo Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Quando si esegue la PCR, viene generalmente selezionata come temperatura di ricottura una temperatura inferiore al valore Tm del primer di 5 °C (il corrispondente aumento della temperatura di ricottura può aumentare la specificità della reazione PCR).
Primer e prodotti PCR:
La lunghezza del prodotto di amplificazione PCR del primer di progettazione è preferibilmente di 100-150 bp.
I primer di progettazione nell'area strutturale secondaria del modello dovrebbero essere evitati il più possibile.
Evitare la formazione di 2 o più basi complementari tra le estremità 3′ dei primer a monte e a valle.
Base terminale Primer 3′ non può essere presente con 3 G o C consecutivi aggiuntivi.
I primer stessi non possono avere strutture complementari, altrimenti si formerà una struttura a forcina che influirà sull'amplificazione della PCR.
ATCG dovrebbe essere distribuito il più uniformemente possibile nella sequenza dei primer e la base terminale 3′ dovrebbe essere evitata come T.
Appendice 1: Cell Direct RT-qPCR Kit componente pacchetto supplementare
1.Soluzione di lisi cellulare
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| Componenti del kit (sistema di lisi a 24 pozzetti/pozzetto) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 tonnellate | 500 t | ||
| ParteIO | Tampone CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Proteasi Plus II | 400 microlitri | 1 millilitro × 2 | |
| Tampone ST | 1 millilitro × 2 | 10 millilitri | |
| ParteII | Cancellatore di DNA | 400 microlitri | 1 millilitro × 2 |
2.RT Mescolare
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| Componenti del kit (sistema di reazione da 20 μl) | DRT-01011-B1 |
| 200 t | |
| 5 × Mix RT diretto | 800 microlitri |
| ddH senza RNasi2O | 1,7 ml × 2 |
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| Componenti del kit (sistema di reazione da 20 μl) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 t | 1000 t | |
| 2 × Direct qPCR Mix-SYBR | 1 millilitro × 2 | 1,7 ml × 6 |
| Colorante di riferimento 50× ROX | 40 microlitri | 200 microlitri |
| ddH senza RNasi2O | 1,7 ml | 10 millilitri |
Manuali di istruzioni:
