Tampone buccale/scheda FTA Kit di isolamento del DNA Kit di estrazione o purificazione del DNA genomico da tamponi buccali
Descrizione del corredo:
Purifica rapidamente DNA genomico di alta qualità da campioni di tamponi buccali/FTA Card.
◮Nessuna contaminazione da RNasi:La colonna solo DNA fornita dal kit consente di rimuovere l'RNA dal DNA genomico senza aggiungere RNasi durante l'esperimento, evitando che il laboratorio venga contaminato da RNasi esogena.
◮Velocità veloce:Foregene Protease ha un'attività più elevata rispetto a proteasi simili e digerisce rapidamente i campioni di tessuto;l'operazione è semplice e l'operazione di estrazione del DNA genomico può essere completata entro 20-80 minuti.
◮Conveniente:La centrifugazione viene eseguita a temperatura ambiente e non è necessaria la centrifugazione a bassa temperatura a 4°C o la precipitazione del DNA con etanolo.
◮Sicurezza:Non è richiesta l'estrazione di reagenti organici.
◮Alta qualità:Il DNA genomico estratto ha grandi frammenti, nessun RNA, nessun RNase e un contenuto di ioni estremamente basso, che può soddisfare i requisiti di vari esperimenti.
◮Sistema di microeluizione:Può aumentare la concentrazione di DNA genomico, che è conveniente per il rilevamento o l'esperimento a valle.
Descrizione
Questo kit fornisce un metodo efficiente e rapido per ottenere DNA genomico ad alta concentrazione da tamponi buccali e FTA Card (macchie di sangue).Utilizzando la nostra azienda'Grazie all'esclusiva colonna e formula di spin della membrana di silice solo DNA, combinata con Foregene Protease, è possibile estrarre DNA genomico ad alta concentrazione e di alta qualità in 80 minuti.La piccola colonna di purificazione appositamente progettata lega il DNA genomico e il DNA può essere eluito con una piccola quantità (15μl) sistema di eluizione per aumentare la concentrazione del DNA genomico ottenuto, che è conveniente per il rilevamento o l'esperimento a valle.Il kit può elaborare uno o più campioni alla volta e il processo di purificazione non richiede l'estrazione di sostanze organiche come fenolo, cloroformio e precipitazione di isopropanolo o etanolo che richiede tempo e l'operazione è semplice e fa risparmiare tempo.
Specifiche
50 preparazioni
Componenti del kit
| Tampone ST1 |
| Tampone ST2 |
| Acrilammide lineare |
| Tampone PW |
| Tampone WB |
| Tampone EB |
| Foregene Proteasi |
| Colonna solo DNA |
| Istruzioni |
Caratteristiche e vantaggi
-Nessuna contaminazione da RNasi: la colonna solo DNA fornita dal kit consente di rimuovere l'RNA dal DNA genomico senza aggiungere RNasi durante l'esperimento, evitando che il laboratorio venga contaminato da RNasi esogena.
-Velocità veloce: Foregene Protease ha un'attività più elevata rispetto a proteasi simili, digerisce rapidamente i campioni;operazione semplice.
-Conveniente: la centrifugazione viene eseguita a temperatura ambiente e non è necessaria la centrifugazione a bassa temperatura a 4°C o la precipitazione del DNA con etanolo.
-Sicurezza: non è richiesta l'estrazione di reagenti organici.
-Alta qualità: il DNA genomico estratto ha grandi frammenti, nessun RNA, nessun RNasi e un contenuto di ioni estremamente basso, che può soddisfare i requisiti di vari esperimenti.
-Sistema di micro-eluizione: può aumentare la concentrazione di DNA genomico, che è conveniente per il rilevamento o l'esperimento a valle.
Applicazione kit
È adatto per la purificazione del DNA genomico dai seguenti campioni: tamponi buccali, FTA Card (macchie di sangue).
Conservazione e durata
-Questo kit può essere conservato per 12 mesi in condizioni asciutte a temperatura ambiente (15-25°C);se necessita di essere conservato per un periodo di tempo più lungo, può essere conservato a 2-8°C.
Nota: se conservata a bassa temperatura, la soluzione è soggetta a precipitazione.Prima dell'uso, assicurarsi di posizionare la soluzione nel kit a temperatura ambiente per un periodo di tempo.Se necessario, preriscaldare a bagnomaria a 37°C per 10 minuti per sciogliere il precipitato e miscelare prima dell'uso.
- La soluzione Foregene Protease ha una formula unica, che è attiva se conservata a temperatura ambiente per lungo tempo (3 mesi);la sua attività e stabilità sarà migliore se conservata a 4°C, quindi si consiglia di conservarla a 4°C, ricordarsi di non conservarla a -20°C.
La colonna di purificazione è ostruita
In questo kit, nell'operazione di estrazione del DNA genomico, la colonna di purificazione viene adsorbita direttamente sulla miscela di lisi enzimatica del campione senza fase di centrifugazione e la colonna di purificazione può essere bloccata a causa dell'enzimaizzazione incompleta e dell'elevata viscosità del campione.
Le seguenti possibili cause sono le seguenti:
1. Digestione enzimatica incompleta di campioni di tessuto.
Raccomandazione: il tempo di elaborazione del campione di Foregene Protease può essere opportunamente esteso oppure il surnatante può essere prelevato dopo la centrifugazione a 12.000 rpm (~ 13.400 × g) per 5 min.
2. Uso eccessivo di campioni di tessuto o tessuti di grandi dimensioni.
Raccomandazione: è meglio non superare 1 tampone buccale nel campione;se il campione è troppo grande, aumentare di conseguenza il dosaggio di Buffer ST1, Foregene Protease, buffer ST2.
3. La viscosità del campione è troppo alta.
Raccomandazione: i campioni possono essere opportunamente diluiti con 10 mM di Tris-HCl prima dell'estrazione del DNA genomico.
4. Sono stati aspirati frammenti della carta ematica.
Raccomandazione: il tempo di centrifugazione transitorio del passaggio 6 dell'estrazione genomica del punto di sangue (scheda FTA) può essere opportunamente esteso.
Bassa resa o assenza di DNA
Ci sono spesso una varietà di fattori che influenzano la resa del DNA genomico, tra cui l'origine del campione, le condizioni di conservazione del campione, la preparazione del campione, la manipolazione, ecc.
Il DNA genomico non può essere ottenuto durante l'estrazione
Le possibili cause sono le seguenti:
1. La conservazione impropria dei campioni o la conservazione troppo lunga porta alla degradazione del DNA genomico.
Raccomandazione: i tamponi orali dovrebbero essere preferibilmente prelevati di recente e non è consigliabile utilizzare tamponi conservati per le operazioni di estrazione del DNA genomico;i campioni di macchie di sangue dovrebbero garantire che la qualità sia qualificata e il tempo di conservazione non dovrebbe essere troppo lungo.
2. Un uso insufficiente di tessuto può comportare l'impossibilità di estrarre il corrispondente DNA genomico.
Raccomandazione: seguire le istruzioni per il campionamento del tampone buccale nella guida operativa e pulire il maggior numero di volte possibile in modo da poter attaccare un numero sufficiente di cellule al tampone orale per l'estrazione del DNA genomico;per l'estrazione del campione di macchie di sangue, l'area di taglio delle macchie di sangue può essere opportunamente aumentata.
3. La Foregene Protease è conservata in modo improprio, con conseguente diminuzione della sua attività o inattivazione.
Raccomandazione: confermare le condizioni di conservazione della Foregene Protease o sostituirla con una nuova Foregene Protease per la reazione enzimatica.
4. Conservazione impropria del kit o tempo di conservazione troppo lungo, con conseguente guasto di alcuni componenti del kit.
Raccomandazione: acquistare un nuovo kit di isolamento del DNA del tampone buccale per le procedure correlate.
5. Il tampone WB non aggiunge etanolo assoluto.
Raccomandazione: verificare che il buffer WB aggiunga il volume corretto di etanolo assoluto.
6. L'eluente non è correttamente aggiunto al film di silicone.
Raccomandazione: aggiungere gocce di eluente preriscaldato a 65 °C al centro della membrana di silicone e lasciare a temperatura ambiente per 5 minuti per aumentare l'efficienza di eluizione.
DNA genomico a basso rendimento isolato
Le seguenti possibili cause sono le seguenti:
1. La conservazione impropria dei campioni o la conservazione troppo lunga porta alla degradazione del DNA genomico.
Raccomandazione: i tamponi orali sono preferibilmente appena campionati e i tamponi conservati non devono essere utilizzati per l'estrazione del DNA genomico.
2. Se la quantità di campione di tessuto è troppo piccola, il contenuto di DNA genomico estratto sarà inferiore.
Raccomandazione: seguire le istruzioni per il campionamento del tampone orale nella guida operativa, pulendo il maggior numero di volte possibile in modo da poter attaccare al tampone orale un numero sufficiente di cellule per l'estrazione del DNA genomico.
3. La Foregene Protease è conservata in modo improprio, con conseguente diminuzione della sua attività o inattivazione.
Raccomandazione: confermare le condizioni di conservazione della Foregene Protease o sostituirla con una nuova Foregene Protease per la reazione enzimatica.
4. Problemi con l'eluente.
Raccomandazione: utilizzare il tampone EB per l'eluizione;se si utilizza ddH2O o altri eluenti, confermare che il pH dell'eluato sia compreso tra 7,0 e 8,5.
5. L'eluato non viene aggiunto goccia a goccia correttamente.
Raccomandazione: aggiungere gocce di eluente al centro della membrana di silicone e lasciare a temperatura ambiente per 5 minuti per aumentare l'efficienza di eluizione.
6. Il liquido di eluizione si accumula troppo poco.
Raccomandazione: utilizzare l'eluente per l'eluizione del DNA genomico come richiesto nelle istruzioni, almeno non meno di 15 μl.
Bassa purezza del DNA genomico isolato
La bassa purezza del DNA genomico può portare al fallimento o a risultati insoddisfacenti degli esperimenti a valle, come ad esempio: gli enzimi non possono essere aperti, la PCR non può ottenere il frammento genetico di interesse, ecc.
Le possibili cause sono le seguenti:
1. Inquinamento da eteroproteine, inquinamento da RNA.
Analisi: la colonna di purificazione non è stata lavata utilizzando il tampone PW;la colonna di purificazione del lavaggio Buffer PW non è stata lavata utilizzando la velocità centrifuga corretta.
Raccomandazione: assicurarsi che non vi sia precipitazione nel supernatante prima di aggiungere etanolo;assicurarsi di lavare la colonna di purificazione secondo le istruzioni e questo passaggio non può essere omesso.
2. Inquinamento da ioni di impurità.
Analisi: la colonna di purificazione del lavaggio con tampone WB è stata omessa o lavata solo una volta, con conseguente contaminazione ionica residua.
Raccomandazione: accertarsi di lavare il tampone WB 2 volte come indicato per rimuovere il più possibile gli ioni residui.
3. Contaminazione da enzimi RNA.
Analisi: RNasi estranee sono state aggiunte al tampone;L'operazione di lavaggio del tampone PW non era corretta, con conseguenti residui di RNasi, che influivano sulle operazioni sperimentali dell'RNA a valle, come la trascrizione in vitro.
Raccomandazione: i kit di isolamento dell'acido nucleico della serie Foregene possono rimuovere l'RNA senza l'aggiunta aggiuntiva di RNasi, quindi il kit di isolamento del DNA con tampone buccale/carta FTA non deve aggiungere RNasi;assicurarsi di seguire le istruzioni per la colonna di purificazione del lavaggio Buffer PW e questo passaggio non può essere omesso.
4. Residuo di etanolo.
Analisi: il tampone WB non ha eseguito la centrifugazione con tubo vuoto dopo aver lavato la colonna di purificazione.
Raccomandazione: eseguire la corretta operazione di centrifugazione con tubo vuoto secondo le istruzioni.
5. Altro inquinamento da impurità.
Analisi: i campioni salvati oi campioni speciali non vengono pretrattati.
Raccomandazione: pretrattare accuratamente il campione come indicato.
