(96 pozzetti) Kit QuickEasy Cell Direct RT-qPCR – SYBR Green I
Descrizioni
IL(96 pozzetti) QuickEasyTM Kit Cell Direct RT-qPCR–SYBR Verde Ifornisceun esclusivo sistema tampone di lisito rilasciare rapidamente RNAda cellule in colturacampioni per reazioni RT-qPCR, eliminando il tempo e laboriosoProcesso di purificazione dell'RNA e richiede solo 7 minuti per ottenere il modello di RNA richiesto.IL5 × Mix RT direttoE2 × Direct qPCR Mix-SYBRfornito nella confezione può rapidamente eottenere in modo efficace quantitativo in tempo realeRisultati della PCR.
5× Direct RT Mix e 2× Direct qPCR Mix-SYBR hanno una forte tolleranza agli inibitori e possono utilizzare il lisato del campione da testare come modello per un'efficiente trascrizione inversa e un'amplificazione specifica.Il reagente contiene l'esclusiva trascrittasi inversa di Foregene con elevata affinità per l'RNA, oltre a Hot D-Taq DNA polimerasi, dNTP, MgCl2 , tampone di reazione, ottimizzatore e stabilizzatore PCR e può essere utilizzato insieme al tampone di lisi per rilevare il campione in modo rapido, semplice e preciso e presenta le caratteristiche di elevata sensibilità, forte specificità e buona stabilità.
Il kit è finalizzato alla lisi del microsistema di cellule in coltura a 96 pozzetti e presenta una buona uniformità e consistenza;i componenti del kit forniscono 96 reazioni di lisi, 96 reazioni di trascrizione inversa e reazioni qPCR 96 × 2, che possono soddisfare la piastra cellulare a 96 pozzetti per un uso singolo, evitando l'inquinamento causato dall'apertura ripetuta, dal congelamento e dallo scongelamento dei reagenti e dal degrado delle prestazioni del reagente.
Componenti del kit
| Composizione del corredo ( 50 μSistema di lisi L/20 microlitriRT sistema di reazione /20μL sistema di reazione qPCR) | DRT-03011 | Nota | |
| 96T | |||
| ParteI | RespingenteCL | 5ml | CellulaLisi |
| ForegeneProteasi Plus II | 100 μL | ||
| RespingenteST | 500 μL | ||
| Parte II | DNAGomma per cancellare | 100 μL | |
| 5 × Mix RT diretto | 400 μL | RT | |
| 2 × Miscela qPCR diretta-SYBR | 1 mL × 2 | qPCR | |
| Colorante di riferimento 50× ROX | 400µL | ||
| RNasi- GratuitoggH2 O | 1,7 ml |
| |
| Mannuale | 1 pezzo | 1 porzione | |
*: Il reagente di lisi DNA Eraser è incluso nella Parte II del kit;I componenti Cell Lysis, RT e qPCR possono essere acquistati separatamente.
Caratteristiche e vantaggi
■Semplice ed efficace: con la tecnologia Cell Direct RT, i campioni di RNA possono essere ottenuti in soli 7 minuti.
■ La richiesta del campione è piccola, è possibile testare solo 10 celle.
■ Alta produttività: può rilevare rapidamente l'RNA nelle cellule coltivate in piastre da 384, 96, 24, 12, 6 pozzetti.
■ DNA Eraser può rimuovere rapidamente i genomi rilasciati, riducendo notevolmente l'impatto sui successivi risultati sperimentali.
■ Il sistema RT e qPCR ottimizzato rende la trascrizione inversa RT-PCR in due fasi più efficiente e la PCR più specifica e più resistente agli inibitori della reazione RT-qPCR.
Applicazione kit
Ambito di applicazione: cellule in coltura.
- RNA rilasciato dalla lisi del campione: applicabile solo al modello RT-qPCR di questo kit.
- Il kit può essere utilizzato per i seguenti scopi: analisi dell'espressione genica, verifica dell'effetto di silenziamento genico mediato da siRNA, screening di farmaci, ecc.
Conservazione e durata
La parte I di questo kit deve essere conservata a 4℃;La parte II deve essere conservata a -20 ℃.
Foregene Protease Plus II deve essere conservato a 4℃, non congelare a -20 ℃.
Reagente 2×Direct qPCR Mix-Taqman deve essere conservato a -20℃nell'oscurità;se usato frequentemente, può anche essere riposto a 4℃ per la conservazione a breve termine (consumare entro 10 giorni).
Principi di progettazione dei primer per PCR in tempo reale
Primer in avanti e primer inverso
Per la Real Time PCR, il design del primer è molto importante.I primer sono correlati alla specificità e all'efficienza dell'amplificazione PCR e possono essere progettati con riferimento ai seguenti principi:
- Lunghezza del primer: 18-30 bp.
- Contenuto in GC: 40-60%.
- Valore Tm: il software di progettazione del primer, come Primer 5, può fornire il valore Tm del primer.I valori Tm dei primer a monte ea valle dovrebbero essere il più vicini possibile.Si può utilizzare anche la formula di calcolo Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Quando si esegue la PCR, viene generalmente selezionata come temperatura di ricottura una temperatura inferiore al valore Tm del primer di 5 °C (il corrispondente aumento della temperatura di ricottura può aumentare la specificità della reazione PCR).
- Primer e prodotti PCR:
- La lunghezza del prodotto di amplificazione PCR del primer di progettazione è preferibilmente di 100-150 bp.
- I primer di progettazione nell'area strutturale secondaria del modello dovrebbero essere evitati il più possibile.
- Evitare la formazione di 2 o più basi complementari tra le estremità 3′ dei primer a monte e a valle.
- Base terminale Primer 3′ non può essere presente con 3 G o C consecutivi aggiuntivi.
- I primer stessi non possono avere strutture complementari, altrimenti si formerà una struttura a forcina che influirà sull'amplificazione della PCR.
- ATCG dovrebbe essere distribuito il più uniformemente possibile nella sequenza dei primer e la base terminale 3′ dovrebbe essere evitata come T.
Appendice1：Cell direttoRT-qPCR Kit comppacchetto supplemento t
1.Soluzione per la lisi cellulare
| Soluzione di lisi cellulare | |||
| Componenti del kit (sistema di lisi a 24 pozzetti/pozzetto) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 tonnellate | 500 t | ||
| ParteIO | Tampone CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Proteasi Plus II | 400 microlitri | 1 millilitro × 2 | |
| Tampone ST | 1 millilitro × 2 | 10 millilitri | |
| ParteII | Cancellatore di DNA | 400 microlitri | 1 millilitro × 2 |
| Miscela RT | |
| Componenti del kit (sistema di reazione da 20 μl) | DRT-01011-B1 |
| 200 t | |
| 5 × Mix RT diretto | 800 microlitri |
| ddH senza RNasi2O | 1,7 ml × 2 |
| Miscela qPCR | ||
| Componenti del kit (sistema di reazione da 20 μl) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 t | 1000 t | |
| 2 × Direct qPCR Mix-Taqman | 1 millilitro × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20 × colorante di riferimento ROX | 40 microlitri | 200 microlitri |
| ddH senza RNasi2O | 1,7 ml | 10 millilitri |
Manuali di istruzioni:
