Cell Direct RT qPCR Kit—Kit Taqman Direct Cell Lysis Cell Ready One-step qRT-PCR Kit Sonda
Descrizioni
Questo prodotto utilizza un esclusivo sistema tampone di lisi per rilasciare rapidamente l'RNA da campioni di cellule in coltura per le reazioni RT-qPCR, eliminando il lungo e laborioso processo di purificazione dell'RNA e solo 7 minuti per ottenere il modello di RNA richiesto, con 5 × Direct RT Mix, 2 × Direct qPCR Mix-Taqman forniti dal kit possono ottenere in modo rapido ed efficiente risultati PCR quantitativi in tempo reale.
5× Direct RT Mix e 2× Direct qPCR Mix-Taqman hanno una forte tolleranza agli inibitori e possono eseguire un'inversione efficiente e un'amplificazione specifica utilizzando il lisato del campione da misurare come templato.Il reagente contiene Foregene Reverse Transcriptase, Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl2, Buffer di reazione, Ottimizzatore PCR e Stabilizzatore, che può essere utilizzato con il tampone di lisi per rilevare rapidamente e facilmente i campioni e presenta le caratteristiche di elevata sensibilità, specificità e stabilità.
Specifiche
200×20μlRxns, 1000×20μlRxns
Componenti del kit
| VeloceFacileTMCell Direct RT-qPCR Kit-Taqman | ||||
| Componenti del kit Sistema di reazione qPCR da 20 μl | DRT-01021 | DRT-01022 | Nota | |
| 200 t | 1000 t | |||
|
Parte I | Tampone CL | 4 millilitri | 20 ml | Lisi cellulare |
| Foregene Proteasi Plus II | 80 microlitri | 400 microlitri | ||
| Tampone ST | 400 microlitri | 1 millilitro × 2 | ||
|
Parte II | Cancellatore di DNA | 80 microlitri | 400 microlitri | |
| 5×Misaggio RT diretto * | 160 microlitri | 800 microlitri | RT | |
| 2× Mix-Taqman qPCR diretto * | 1 millilitro × 2 | 1,7 ml × 6 | qPCR | |
| Colorante di riferimento 20×ROX | 40 microlitri | 200 microlitri | ||
| ddH senza RNasi2O | 1,7 ml | 10 millilitri | ||
| Manuale di istruzioni | 1 pezzo | 1 pezzo | ||
*:Cell Lysis, 5×Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman possono essere acquistati separatamente
Caratteristiche e vantaggi
■Semplice ed efficace: con la tecnologia Cell Direct RT, i campioni di RNA possono essere ottenuti in soli 7 minuti.
■ La richiesta del campione è piccola, è possibile testare solo 10 celle.
■ Alta produttività: può rilevare rapidamente l'RNA nelle cellule coltivate in piastre da 384, 96, 24, 12, 6 pozzetti.
■ DNA Eraser può rimuovere rapidamente i genomi rilasciati, riducendo notevolmente l'impatto sui successivi risultati sperimentali.
■ Il sistema RT e qPCR ottimizzato rende la trascrizione inversa RT-PCR in due fasi più efficiente e la PCR più specifica e più resistente agli inibitori della reazione RT-qPCR.
Applicazione kit
Ambito di applicazione: cellule in coltura.
- RNA rilasciato dalla lisi del campione: applicabile solo al modello RT-qPCR di questo kit.
- Il kit può essere utilizzato per i seguenti scopi: analisi dell'espressione genica, verifica dell'effetto di silenziamento genico mediato da siRNA, screening di farmaci, ecc.
Conservazione e durata
La parte I di questo kit deve essere conservata a 4℃;La parte II deve essere conservata a -20 ℃.
Foregene Protease Plus II deve essere conservato a 4℃, non congelare a -20 ℃.
Reagente 2×Direct qPCR Mix-Taqman deve essere conservato a -20℃nell'oscurità;se usato frequentemente, può anche essere riposto a 4℃ per la conservazione a breve termine (consumare entro 10 giorni).
Principi di progettazione dei primer per PCR in tempo reale
Primer in avanti e primer inverso
Per la Real Time PCR, il design del primer è molto importante.I primer sono correlati alla specificità e all'efficienza dell'amplificazione PCR e possono essere progettati con riferimento ai seguenti principi:
- Lunghezza del primer: 18-30 bp.
- Contenuto in GC: 40-60%.
- Valore Tm: il software di progettazione del primer, come Primer 5, può fornire il valore Tm del primer.I valori Tm dei primer a monte ea valle dovrebbero essere il più vicini possibile.Si può utilizzare anche la formula di calcolo Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Quando si esegue la PCR, viene generalmente selezionata come temperatura di ricottura una temperatura inferiore al valore Tm del primer di 5 °C (il corrispondente aumento della temperatura di ricottura può aumentare la specificità della reazione PCR).
- Primer e prodotti PCR:
- La lunghezza del prodotto di amplificazione PCR del primer di progettazione è preferibilmente di 100-150 bp.
- I primer di progettazione nell'area strutturale secondaria del modello dovrebbero essere evitati il più possibile.
- Evitare la formazione di 2 o più basi complementari tra le estremità 3′ dei primer a monte e a valle.
- Base terminale Primer 3′ non può essere presente con 3 G o C consecutivi aggiuntivi.
- I primer stessi non possono avere strutture complementari, altrimenti si formerà una struttura a forcina che influirà sull'amplificazione della PCR.
- ATCG dovrebbe essere distribuito il più uniformemente possibile nella sequenza dei primer e la base terminale 3′ dovrebbe essere evitata come T.
Appendice1：Cell direttoRT-qPCR Kit comppacchetto supplemento t
1.Soluzione per la lisi cellulare
| Soluzione di lisi cellulare | |||
| Componenti del kit (sistema di lisi a 24 pozzetti/pozzetto) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 tonnellate | 500 t | ||
| ParteIO | Tampone CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Proteasi Plus II | 400 microlitri | 1 millilitro × 2 | |
| Tampone ST | 1 millilitro × 2 | 10 millilitri | |
| ParteII | Cancellatore di DNA | 400 microlitri | 1 millilitro × 2 |
| Miscela RT | |
| Componenti del kit (sistema di reazione da 20 μl) | DRT-01011-B1 |
| 200 t | |
| 5 × Mix RT diretto | 800 microlitri |
| ddH senza RNasi2O | 1,7 ml × 2 |
| Miscela qPCR | ||
| Componenti del kit (sistema di reazione da 20 μl) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 t | 1000 t | |
| 2 × Direct qPCR Mix-Taqman | 1 millilitro × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20 × colorante di riferimento ROX | 40 microlitri | 200 microlitri |
| ddH senza RNasi2O | 1,7 ml | 10 millilitri |
Manuali di istruzioni:
