Kit RT-qPCR diretto III
Descrizione del corredo:
◮Il kit RT-qPCR diretto, che utilizza Foreasy Reverse Transcriptase e Foreasy HS Taq DNA Polymerase sviluppato da Foregene, con tampone di reazione unico, rende questo kit con una forte resistenza e compatibilità e può testare direttamente la reazione utilizzando il sistema Foregene Lysis come modello.Questo kit può richiedere il kit di rilevamento dell'acido nucleico COVID-19 e lo sviluppo del kit di rilevamento dell'acido nucleico di altri batteri patogeni.
Descrizione
Il kit RT-qPCR diretto fornisce un tampone RT-qPCR confezionato separatamente (con Foreasy HS Taq DNA polimerasi miscelato) e un'elevata efficienzaForeasy trascrittasi inversa (MMLV),rendendolo conveniente per la creazione di kit di back-end e la regolazione del sistema ， con una semplice verifica.
Il kit RT-qPCR diretto, che utilizza Foreasy Reverse Transcriptase e Foreasy HS Taq DNA Polymerase sviluppato da Foregene, con tampone di reazione unico, rende questo kit con una forte resistenza e compatibilità e può testare direttamente la reazione utilizzando il sistema Foregene Lysis come modello.Questo kit può richiedere il kit di rilevamento dell'acido nucleico COVID-19 e lo sviluppo del kit di rilevamento dell'acido nucleico di altri batteri patogeni.
Questo kit può essere direttamente il componente del prodotto IVD, utilizzando facilmente e velocemente.Ha solo bisogno di una facile verifica, senza svilupparsi di nuovo.
Specifiche
500 tonnellate, 50.000 tonnellate
Componenti del kit
| Contenuto del kit (sistema di reazione da 20 μL) | IM-05111-03 | IM-05112-03 |
| 500 t | 50.000 t | |
| Foreasy Rtrascrittasi eversa(200 unità/μL) | 50 microlitri×1 | 1 millilitro×5 |
| 2 × qPCR direttaMix-Taqman | 1 ml × 5 | 500ml×1 |
| Istruzione | 1 | 1 |
Fasi operative
A: Preparare il templato e il reagente
1. Preparare il modello di RNA preparato (si consiglia di utilizzare il kit della serie Foregene Total RNA Isolation Kit per estrarre e purificare il modello di RNA) o il prodotto di cracking del campione (si consiglia di utilizzare il sistema Foregene Lysis), primer specifici (10 μM) e altri materiali di consumo pertinenti, strumento.
2. Mettere 2× Direct RT-qPCR Buffer, RNase-Free ddH2O e 20× ROX Reference Dye (se necessario) nella scatola con del ghiaccio, facendoli sciogliere naturalmente, e mescolare delicatamente.
B: Preparare il sistema RT-qPCR
Ottenere metà del volume del tampone di reazione del sistema di reazione (ad esempio, se il volume del sistema è di 20 μL, è necessario ottenere 10 μL 2× Direct RT-qPCR Buffer). Percorrispondente quantità di enzima, lo suggeriamoM-MLV: sistema di reazione 10-30 U/20 μL,TaqDNA polimerasi：Sistema di reazione 1-2 U/20 μLquesto è il nostro suggerimento, dovresti testarlo e regolarlo), aggiungere il modello di RNA, primer e sonde specifici e aggiungere ddH senza RNasi2O a 20 microlitri.La preparazione specifica del sistema di reazione RT-qPCR può essere riferita alla seguente tabella 1.
Tabella 1: preparazione del sistema RT-qPCR
| Componente | Volume | Concentrazione finale |
| 2 × Tampone RT-qPCR diretto | 10 microlitri | 1× |
| Foreasy trascrittasi inversa (MMLV) | 10-30 unità | |
| Foreasy HS Taq DNA polimerasi | 1-2 u | |
| Primer in avanti (10 μM) | 0,8 microlitri | 50-900nm |
| Primer inverso (10 μM) | 0,8 microlitri | 50-900nm |
| Sonda (4 μM) | 1 microlitro | 200nm |
| Modello (RNA o lisato) | X microlitri | |
| 20 × colorante di riferimento ROX | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6,4-X) microlitri | |
| Volume totale | 20 microlitri |
Nota: Forward Primer e Reverse Primer sono primer specifici del gene bersaglio.Il sistema del qPCR potrebbe essere regolato secondo pratici modelli sperimentali e PCR.Raccomandiamo 400nM per la concentrazione finale della maggior parte dei primer.Regolare il volume di primer e sonde specifici in base alla concentrazione preparata e alla concentrazione finale consigliata, per favore.
1*: selezionare la concentrazione finale adeguata del colorante di riferimento ROX in base a diversi strumenti PCR quantitativi.La concentrazione ottimale del colorante di riferimento ROX dei comuni strumenti PCR quantitativi è mostrata nella tabella seguente:
| Strumenti per la PCR quantitativa | Concentrazione finale del colorante di riferimento ROX |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Fase Uno,eccetera. | 1× (ad esempio, aggiungere 1μl 20×ROX Reference Dye in un sistema di reazione da 20 μL) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P e Mx4000, ecc. | 0,5× (ad esempio, aggiungere 0,5μl 20×ROX Reference Dye in un sistema di reazione da 20 μL) |
| Strumento PCR Roche, strumento PCR Bio-Rad, strumento PCR quantitativo Eppendorf, ecc. | Senza colorante di riferimento ROX |
Conservazione e durata
Il kit deve essere conservato a -20 ± 5℃.Dovrebbe essere immediatamente conservato in un frigorifero termostatico a -20 ℃.Il periodo di validità è di 2 anni se conservato in condizioni idonee.
