Kit RT-qPCR diretto
Descrizione
Il kit RT-qPCR diretto fornisce un tampone RT-qPCR confezionato separatamente e un enzima ad alta efficienzamiscela (Taq、M-MLV、RI) , che lo rende conveniente per la creazione di kit e sistemi di back-endregolazione , all'interno di una semplice verifica.
Specifiche
500 tonnellate, 50.000 tonnellate
Componenti del kit
Contenuto del kit (sistema di reazione da 20 μL) | IM-05111-01 | IM-05112-01 |
500 t | 50.000 t | |
Miscela di enzimi diretti | 500 microlitri×1 | 50ml×1 |
2 × Tampone RT-qPCR diretto | 1 millilitro×5 | 500ml×1 |
Istruzione | 1 | 1 |
Fasi operative
Prima della preparazione dei reagenti, tutti i reagenti nel kit devono essere scongelati a temperatura ambiente e miscelati delicatamente.
A: Preparare of modello E reagente
1. Preparare il modello di RNA preparato (si consiglia di utilizzare il kit della serie Foregene Total RNA Isolation Kit per estrarre e purificare il modello di RNA) o il prodotto di cracking del campione (si consiglia di utilizzare il sistema Foregene Lysis), primer specifici (10 μM) e altri materiali di consumo pertinenti, strumento.
2. Mettere 2× Direct RT-qPCR Buffer, RNase-Free ddH2O e 20× ROX Reference Dye (se's necessario) nella scatola con ghiaccio, facendoli sciogliere naturalmente e mescolando delicatamente.
B: Preparare of RT-qPCR sistema
Tavolo 1 : Preparare of RT-qPCR ssistema
Componente | Volume | Concentrazione finale |
2 × Tampone RT-qPCR diretto | 10 microlitri | 1× |
Miscela di enzimi diretti | 1microlitri | |
Primer in avanti (10 μM) | 0,8 microlitri | 50-900nm |
Primer inverso (10 μM) | 0,8 microlitri | 50-900nm |
Sonda (4 μM) | 1microlitri | 200nm |
Modello (RNA o lisato) | X microlitri | |
Colorante di riferimento 20×ROX | - | 1* |
RNase-FreeddH2O | (6,4-X) microlitri | |
Volume totale | 20microlitri |
C: Impostato IL RT-qPCR reazione programma
Tavolo 2 : RT-qPCR reattion programma collocamento (per esempio: due-fare un passo metodo)
Fare un passo | Temperatura | Tempo | Cicli | Contenuto | |
1 | 50℃ | 15 minuti | 1* | 1 | Trascrizione inversa |
2 | 95℃ | 1 minuto | 1 | Pre-denaturazione | |
3 | 95℃ | 10 sec | 40-45 | Denaturazione | |
60℃ | 30 secondi 2* | Ricottura/estensione |
Conservazione e durata
-Il kit deve essere conservato a -20± 5℃.Il periodo di validità è di 12 mesi.
-Evitare ripetuti cicli di congelamento-scongelamento (<5 cicli).