Il basso rapporto di A260/A230 è solitamente causato da impurità con la massima lunghezza d'onda di assorbimento a 230 nm.Vediamo cosa includono queste impurità:

• Inquinanti comuni	Lunghezza d'onda di assorbimento	Effetto rapporto
  Proteina	~230nm e 280nm	Riduzione simultanea di A260/A 280e A260/A 280rapporti
  Sale di guanidina	220-240nm	Ridurre l'A260/A 280rapporto
  Fenolo	~270 nm	-
  Trizol	~230nm e 270nm	Ridurre l'A260/A 280rapporto
  EDTA	~230 nm	Ridurre l'A260/A 280rapporto
  Etanolo	230-240nm	Ridurre l'A260/A 280rapporto

 
 
 
Lunghezza d'onda di assorbimento e valore di contrasto dei comuni inquinanti

Pcontaminazione da proteine
L'inquinamento da proteine ​​può essere considerato l'inquinamento più comune nel processo di estrazione dell'acido nucleico.La proteina esiste tra la fase acquosa superiore e quella inferiorebiologicofase .L'inquinamento ridurrà il rapporto di A260/A280 e A260/A230 allo stesso tempo, e il rapporto di A260/A230 cambierà in modo più evidente rispetto al rapporto di A260/A280.
Durante il successivotrascrizione inversaor reazioni qPCR, i residui proteici possono inibire o interferire con la funzione enzimatica.Il modo migliore per evitare la contaminazione proteica è tenere presente il principio "piuttosto meno che più, una piccola quantità molte volte" durante l'aspirazione del surnatante.

2. Inquinamento da guanidinio
il cloridrato (GuHCl) e il tiocianato di guanidina (GTC) hanno l'effetto di denaturare le proteine, che possono distruggere rapidamente le membrane cellulari durante il processo di estrazione dell'acido nucleico, provocando la denaturazione e la precipitazione delle proteine.La lunghezza d'onda di assorbimento di GuHCl e GTC è compresa tra 220-240 nm e ilil sale di guanidinio residuo ridurrà il rapporto di A260/A230.Sebbene il sale di guanidinio residuo riduca il rapporto,l'impatto sugli esperimenti a valle è in realtà trascurabile.

3. Contaminazione da Trizol
Il componente principale di Trizol è il fenolo.La funzione principale del fenolo è quella di lisare le cellule e rilasciare proteine ​​e sostanze di acido nucleico nelle cellule.Sebbene il fenolo possa effettivamente denaturare le proteine, non può inibire completamente l'attività dell'RNasi.Pertanto, al TRIzol vengono aggiunti 8-idrossichinolina, isotiocianato di guanidina, β-mercaptoetanolo, ecc. per inibire l'RNasi endogena ed esogena.
Quando si estrae l'RNA cellulare, Trizol può lisare rapidamente le cellule e inibire la nucleasi rilasciata dalle cellule, e il Trizol residuo ridurrà significativamente il rapporto A260/A230.
Metodo di elaborazione: Quando si centrifuga, si deve notare che il fenolo in Trizol è facilmente solubile nella fase acquosa nella condizione di 4° e temperatura ambiente.

4. Residuo di etanolo
L'etanolo viene utilizzato nel processo finale per precipitare il DNA mentre dissolve gli ioni salini che possono essere legati al DNA.La lunghezza d'onda di assorbimento del più altopicco di assorbimento dianche l'etanolo è a 230-240 nm, cheridurrà anche il rapporto A260/A230.
Il metodo per evitare residui di etanolo può essere ripetuto due volte durante l'eluizione finale, soffiando nelcappa aspiranteper due minuti per consentire all'etanolo di evaporare completamente prima di aggiungere il tampone per l'eluizione.
Tuttavia, dovrebbe essere noto che il rapporto è solo un indice di valutazione della qualità dell'RNA.Se le suddette operazioni sono strettamente regolamentate, la deviazione tra il rapporto e l'intervallo standard non avrà un grande impatto sugli esperimenti a valle.
Prodotti correlati:
Kit di isolamento dell'RNA totale animale
Kit di isolamento dell'RNA totale della pianta
Kit di isolamento dell'RNA totale delle cellule
Kit di isolamento dell'RNA totale delle piante Plus